生物化学25介绍.ppt

第25章 DNA的复制和修复 遗传信息传递的 中心法则 目 录 DNA的复制 DNA的半保留复制实验依据 复制中的大肠杆菌染色体放射自显影图(Caims实验) 原核生物DNA聚合反应有关的酶类 DNA聚合酶催化的链延长反应 大肠杆菌三种DNA聚合酶比较 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ全酶的结构和功能 连接酶连接切口 大肠杆菌复制起点成串排列的重复序列 原核细胞DNA的半不连续复制复制过程 大肠杆菌复制体结构示意图 大肠杆菌染色体复制的终止 复制叉处前导链和随后链同时合成的工作模型 复制的忠实性 DNA聚合酶的校对功能 DNA聚合酶的校对功能 起始时以RNA作为引物的作用 真核细胞DNA复制的特点 真核生物的DNA聚合酶 端粒酶（telomerase） 端粒合成的一种模型 真核和原核DNA细胞复制比较 第二节 DNA的损伤与修复 DNA的损伤和切除修复 DNA的重组修复 SOS反应的机制 第三节 DNA的突变 DNA突变的类型 逆转录作用 逆转录过程中cDNA的合成 逆转录病毒的生活周期 第五节 DNA的遗传重组 某些物理化学因子，如紫外线、电离辐射和化学诱变剂等，都有引起生物突变和致死的作用，其机理是作用于DNA，造成DNA结构和功能的破坏，称为DNA的损伤。DNA的修复主要有以下类型: 暗修复 四、诱导修复（SOS修复） 一、回复修复 二、切除修复 三、重组修复 DNA损伤的原因 （一）DNA分子的自发性损伤 1、DNA复制中的错误 校正后的错配率仍约在10-10左右 。 2、DNA的自发性化学变化 ①碱基的异构互变 DNA中的4种碱基各自的异构体间都可以自发地相互变化（例如烯醇式与酮式碱基间的互变），这种变化就会使碱基配对间的氢键改变，可使腺嘌呤能配上胞嘧啶、胸腺嘧啶能配上鸟嘌呤等，如果这些配对发生在DNA复制时，就会造成子代DNA序列与亲代DNA不同的错误性损伤。 ②碱基的脱氨基作用:碱基的环外氨基有时会自发脱落，从而胞嘧啶会变成尿嘧啶、腺嘌呤会变成次黄嘌呤（H）、鸟嘌呤会变成黄嘌呤（X）等，遇到复制时，U与A配对、H和X都与C配对就会导致子代DNA序列的错误变化。胞嘧啶自发脱氨基的频率约为每个细胞每天190个。 ③脱嘌呤与脱嘧啶 自发的水解可使嘌呤和嘧啶从DNA链的核糖磷酸骨架上脱落下来。一个哺乳类细胞在37℃条件下，20h内DNA链上自发脱落的嘌呤约1000个、嘧啶约500个；估计一个长寿命不复制繁殖的哺乳类细胞（如神经细胞）在整个生活期间自发脱嘌呤数约为108，这占细胞DNA中总嘌呤数约3%。 ④碱基修饰与链断裂 细胞呼吸的副产物O2-、H2O2等会造成DNA损伤，能产生胸腺嘧啶乙二醇、羟甲基尿嘧啶等碱基修饰物，还可能引起DNA单链断裂等损伤，每个哺乳类细胞每天DNA单链断裂发生的频率约为5万次。此外，体内还可以发生DNA的甲基化，结构的其他变化等，这些损伤的积累可能导致老化。 （二）物理因素引起的DNA损伤 1、紫外线引起的DNA损伤 DNA分子损伤最早就是从研究紫外线的效应开始的。当DNA受到最易被其吸收波长（~260nm）的紫外线照射时，主要是使同一条DNA链上相邻的嘧啶以共价键连成二聚体，相邻的两个T、或两个C、或C与T间都可以环丁基环（cyclobutane ring）连成二聚体，其中最容易形成的是TT二聚体。 人皮肤因受紫外线照射而形成二聚体的频率可达每小时5×104/细胞，但只局限在皮肤中，因为紫外线不能穿透皮肤。但微生物受紫外线照射后，就会影响其生存。紫外线照射还能引起DNA链断裂等损伤。 2、电离辐射引起的DNA损伤 电离辐射损伤DNA有直接和间接的效应，直接效应是DNA直接吸收射线能量而遭损伤，间接效应是指DNA周围其他分子（主要是水分子）吸收射线能量产生具有很高反应活性的自由基进而损伤DNA。电离辐射可导致DNA分子的多种变化： ①碱基变化 主要是由OH-自由基引起，包括DNA链上的碱基氧化修饰、过氧化物的形成、碱基环的破坏和脱落等。一般嘧啶比嘌呤更敏感。 ②脱氧核糖变化 脱氧核糖上的每个碳原子和羟基上的氢都能与OH-反应，导致脱氧核糖分解，最后会引起DNA链断裂。 ③DNA链断裂 这是电离辐射引起的严重损伤事件，断链数随照射剂量而增加。射线的直接和间接作用都可能使脱氧核糖破坏或磷酸二酯键断开而致DNA链断裂。DNA双链中一条链断裂称单链断裂（single strand broken），DNA双链在同一处或相近处断裂称为双链断裂（double strand broken）。虽然单断发生频率为双断的10-20倍，但还比较容易修复；对单倍体细胞（如细菌）一次双断就是致死事件。 ④