金黄色葡萄球菌在健康大学生鼻腔中定植状况与耐药性调查.pdfVIP

·中文论著摘要· 金黄色葡萄球菌在健康大学生鼻腔中定植状况 及耐药性调查 刖 舌 aureus)广泛分布于自然界及人类和动物的皮 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus 肤、与外界相通的腔道粘膜表面，可产生多种毒素和毒素酶，是引起人类机会性、 医院内感染的主要病原菌之一。自20世纪60年代在欧美首先发现耐甲氧西林金 黄色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphylococccus 临床分离的葡萄球菌中比例不断增加，已成为医院内感染的重要病原菌；研究表 明，我国MRSA感染已占到医院内感染的25％以上，MRSA感染占金黄色葡萄球 菌感染的74％以上。目前，MRSA感染已不仅是医院内获得性疾病，社区获得性 对人类健康产生威胁。因此，对健康人群金黄色葡萄球菌定植状况、感染、耐药 性进行调查及研究，了解MRSA在健康大学生鼻腔中定植状况及耐药性，为防止 更多耐药株形成，指导合理使用抗生素具有重要的意义。 方 法 l、鼻拭子样本增菌培养 实验对象为中国医科大学五年制本科生；实验对象分为两组，A组320名学 生样本由学生在病原生物学实验课中自行采集；B组210名学生样本由研究者采 集：从学生鼻腔深处取菌，接种于LB培养基(液态)培养，增加细菌菌量。 2、革兰氏染色 增菌后样本进行革兰氏染色：涂片—干燥一固定一染色一镜检； A组样本的实验操作分别由学生和研究者进行，B组样本的实验操作均由研 究者进行。 3、高盐甘露醇培养基分离培养 用已烧灼灭菌冷却的接种环取革兰氏染色呈阳性、球形的LB培养基培养菌 液，按分段划线法接种于高盐甘露醇琼脂培养基上，放37。C电热恒温箱培养36h。 4、血浆凝固酶试验 取干净载玻片，用记号笔在背面划三圆圈，按序号标记(1～3)；取50山生 理盐水滴到第2、3个标记圈内，取501．tl兔血浆滴到第1、3个标记圈内，取501xl 革兰氏染色呈阳性、球形的LB培养菌液滴到第1、2个标记圈内，并充分混匀， 15s内观察结果。 5、药物敏感性试验 按无菌操作法用接种环从双阳性金黄色葡萄球菌(高盐甘露醇培养基培养阳 性、血浆凝固酶试验阳性)LB培养基中取菌液，用灭菌玻璃棒反复均匀涂于普通 琼脂平板培养基上(注意不要划破培养基)，以便生长出均匀的菌苔。用沾酒精点燃 灭菌的小镊子取药物纸片(青霉素G、氨苄西林、红霉素、链霉素、庆大霉素) 贴于普通平板培养基上，并轻轻按压贴紧，放37℃电热恒温箱培养17h。 6、PCR扩增法进行mecA基因检测 取5m经碎菌处理的双阳性金黄色葡萄球菌(高盐甘露醇培养基培养阳性、 血浆凝固酶试验阳性)LB培养菌液为模板，于94。C变性5min，进行PCR循环； 30s、50℃30s、72。C 循环条件为：于94。C lmin，共40个循环；最后于72℃再延 30min)，于计算机照相处理系统观察、照相。 7、统计学处理 应用SPSSl3．5软件对所得数据进行统计学分析。 结 果 1、A组320例健康大学生鼻腔样本中56例革兰氏染色呈阳性、球形细菌， 其中26例高盐甘露醇培养基培养呈阳性，27例血浆凝固酶试验呈阳性，24例金 黄色葡萄球菌呈双阳性(高盐甘露醇培养基培养阳性、血浆凝固酶试验阳性)；24 2 例双阳性金黄色葡萄球菌中5例对青霉素G耐药、4例对氨苄西林耐药、3例对 红霉素耐药，4例存在耐药基因(mecA基因)。 2、B组210例健康大学生鼻腔样本中123例革兰氏染色呈阳性、球形细菌， 其中27例高盐甘露醇培养基培养呈阳性，24例血浆凝固酶试验呈阳性，22例金 黄色葡萄球菌呈双阳性(高盐甘露醇培养基培养阳性、血浆凝固酶试验阳性)；22 例双阳性金黄色葡萄球菌中12例对青霉素G耐药、10例对氨苄西林耐药、3例 对红霉素耐药，11例存在耐药基因(meeA基因)。 ：皇口结论，匕 l、A组320例健康大学生自行采