核酸检测实验室建立与应用解答.ppt

核酸检测实验室建立与应用 卫生部临检中心深圳市血液中心血液病毒核酸检测联合实验室 核酸实验室人员要求 资质:经过临检中心PCR培训班培训并取得上岗证；通过血站核酸实验室岗前培训考试合格。 培训:①无”核酸”的概念形成, ②防污染的概念③良好工作习惯的培养. ④报告的正确发放. 后备人员的培养. 核酸试剂质控 试剂的确认 试剂运输过程的控制(温度\条件\时限) 灵敏度的要求 内标的要求 试剂涵盖的基因型 检测流程(3):平行检测流程 标准操作规程(SOP)的编写 核酸实验室设置与管理规范 核酸实验室标本检测流程 核酸实验室岗位职责 核酸实验室关键试剂管理规范 核酸实验室仪器设备管理规范 核酸实验室检测标本管理规范 核酸实验室室间质量评价规范 核酸实验室记录管理制度 核酸实验室生物防护规范 核酸反应性献血者追踪规程 核酸实验室检测应急措施 标准操作规程(SOP)的编写 核酸标本离心交接操作规程 核酸标本提取及汇集操作规程(科华) 核酸标本扩增检测操作规程（科华） 核酸标本全自动检测分析系统操作规程（CHIRON） 核酸标本检测报告发布操作规程（唐山软件） 核酸标本检测复检操作规程 生物安全柜标准操作规程 可移动紫外线灯标准操作规程 低温高速离心机标准操作规程 ABI 7300型核酸扩增荧光检测仪标准操作规程 核酸实验室防污染措施 主要的污染源 扩增产物 标本之间产生的气溶胶 操作人员 手 衣服 核酸实验室防污染措施 要有独立的空气处理系统. 各区始终处于完全分隔的状态，不能有空气的直接相通 实验室保持合理的通风 对各区内的设备、物料进行标示，专区专用；其他物品不得混用（例如：笔、纸张） 空气：试剂准备区→标本制备区→扩增区→产物分析区 试剂阳性对照储存在标本制备区 使用带滤芯的吸头 核酸实验室防污染措施 使用外排式的生物安全柜 自配试剂应分装成小规格，未用完的试剂应废弃 使用次氯酸钠溶液消毒（台面、地面） 使用1mol/L的HCL溶液（吸头） 使用紫外线照射（空气和台面） 使用无水乙醇溶液（空气喷雾） 核酸实验室污染后措施 实验室污染后，如何处理？ 通风 次氯酸钠溶液（扩增区不宜使用） HCL溶液（吸头） 紫外线（固定、移动） 酒精喷洒（空气） 应设计有备用实验室 : 如开设独立的报告发放区作为备用 核酸试剂灵敏度评估 用国际标准品稀释成不同浓度评估血液HBV核酸筛查方法，结果如下。请计算95%的检出限量及可信范围CI Analysis of Parameter Estimates? Standard 95% Confidence Chi- Parameter DF Estimate Error Limits Square Pr ChiSq? Intercept 1 -4.6852 1.5659 -7.7542 -1.6161 8.95 0.0028log10(Dose) 1 4.8000 1.4699 1.9190 7.6810 10.66 0.0011? 阳性献血者的追踪 沟通原则:专业授权、人性化、保密、尊敬。 沟通方式：电话、面谈 沟通技巧：表扬和鼓励、合理解释、知情、适当的问候 献血者核酸检测不合格解释 由于核酸检测方法目前尚不能排除假阳性，对实验过程要求极高，另外乙肝和丙肝病毒进入人体后，人体又有清除现象，但血液不能用于临床，因此核酸检测不合格血液仅表示该血液不能用于临床输血。 不作为献血者健康体检指标。 更不宜作为疾病诊疗指标。 献血者献血权利仍保留。 关于核酸检测的解释 汇集结果成反应性,拆分结果为阴性. 内标失败. ELISA(+),核酸结果为(-) ELISA(-),核酸结果为(+) 核酸单检结果反应性与血液发放. 化学发光法与核酸检测. 深圳血液中心核酸检测概况 对161228人份酶免疫检测结果阴性标本进行核酸检测，共检出33例不相同HBV DNA阳性献血者，总比率为1：4885。 检出anti-HCV阴性、 HCV RNA阳性1例，定量结果为1.2×105IU/ml。3个月后追踪结果发现anti-HCV（+），ALT由正常升高至700U/L。 HBV DNA阳性献血者追踪情况 对17位HBV DNA阳性献血者进行了追踪，9位献血者发生血清转换现象。 4例呈窗口期特征（或部分）， 2例献血者发现病毒感染后自愈现象 1例献血者原为乙肝大三阳患者，经治疗后HBsAg转阴后，献血，常规检测为合格，核酸