第12章DNA生物合成总结.ppt

* 解螺旋酶(helicase) —利用ATP供能，作用于氢键 使DNA双链解开成为两条单链 引物酶(primase) —复制起始时催化生成RNA引物的酶 单链DNA结合蛋白(single stranded DNA binding protein, SSB) —在复制中维持模板处于单链状态并保护单链的完整 10 8 局部解链后 DNA拓扑异构酶(DNA topoisomerase) 解链过程中正超螺旋的形成 目 录 * 拓扑异构酶作用特点 既能水解 、又能连接磷酸二酯键 拓扑异构酶Ⅰ 拓扑异构酶Ⅱ 分类 * 拓扑异构酶Ⅰ 切断DNA双链中一股链，使DNA解链旋转不致打结；适当时候封闭切口，DNA变为松弛状态。 反应不需ATP。 拓扑异构酶Ⅱ 切断DNA分子两股链，断端通过切口旋转使超螺旋松弛。 利用ATP供能，连接断端，DNA分子进入负超螺旋状态。 作用机制 * 五、DNA连接酶 连接DNA链3?-OH末端和相邻DNA链5?-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连接成一条完整的链。 P HO 5’ DNA连接酶 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ ATP ADP * DNA连接酶在复制中起最后接合缺口的作用。 在DNA修复、重组及剪接中也起缝合缺口作用。 也是基因工程的重要工具酶之一。 连接酶功能 * DNA生物合成过程 The Process of DNA Replication 第三节 * 1.复制的起始:?解链及复制叉的形成 ?引发体的形成—引物的合成 2.链的延伸:?领头链和冈 崎片的形成 ?随从链 3.链的终止 ? 引物的切 除和缺口的填补 ?随从 链DNA片段的连接 一、原核生物的DNA生物合成 * E.coli复制起始点 oriC GATTNTTTATTT ··· GATCTNTTNTATT ··· GATCTCTTATTAG ··· 1 13 17 29 32 44 ···TGTGGATTA-‖-TTATACACA-‖-TTTGGATAA-‖-TTATCCACA 58 66 166 174 201 209 237 245 串联重复序列 反向重复序列 5? 3? 5? 3? （一）复制的起始 Dna A Dna B、 Dna C DNA拓扑异构酶 引物酶 SSB 3? 5? 3? 5? 引发体和引物 含有解螺旋酶、DnaC蛋白、引物酶和DNA复制起始区域的复合结构称为引发体。 3? 5? 3? 5? 引物是由引物酶催化合成的短链RNA分子。 引物 3 HO 5 引物酶 引物 * （二）复制的延长 在DNA-pol催化下，dNTP以dNMP的方式逐个加入引物上或延长中的子链上，其化学本质是磷酸二酯键的不断生成。 方向：子链 合成的方向为5’ 3’ 特点：半不连续复制 科学出版社案例式教材《生物化学》课件 * DNA聚合酶Ⅲ 拓扑酶 SSB 解螺旋酶 引物酶 引物 冈崎片段 领头链 随从链 * 原核生物基因是环状DNA，双向复制的复制片段在复制的终止点(ter)处汇合。 ori ter E.coli 82 32 ori ter SV40 50 0 （三）复制的终止 5? 5? 5? RNA酶 OH P 5? DNA-pol Ⅰ dNTP 5? 5? P ATP ADP+Pi 5? 5? DNA连接酶 切除引物、填补空隙、连接缺口 复 制 过 程 动 画 * 哺乳动物的细胞周期 DNA合成期 G1 G2 S M 二、真核生物的DNA生物合成 ? 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关。 ? 蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用。 * ? 多个起始点，双方向复制，是多复制子。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 ? 复制的起始需要DNA-polα（引物酶活性）和polδ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 ? 增殖细胞核抗原(prolife