新柱层析分离丙种球蛋白与核黄素(Sephadex—G50,葡聚糖凝胶).pptxVIP

柱层析分离丙种球蛋白与核黄素（Sephadex—G50,葡聚糖凝胶）;目录;;作为维生素B族的成员之 一，核黄素水溶性较低，但在碱性溶液中 容易溶解，在强酸溶液中稳定，光照及紫 外照射引起不可逆的分解。可溶于氯化钠 溶液，维生素B2是机体中许多酶系统的重 要辅基的组成成分，参与物质和能量代谢。 核黄素在机体中有递氢的作用，并是机体 中一些重要的氧化还原酶的辅酶。 ;维生素B2的生理功能 　　1、 参与碳水化合物、蛋白质、核酸和脂肪的代谢可提高肌体对蛋白质的利用率，促进生长发育。 　　2、 参与细胞的生长代谢，是肌体组织代谢和修复的必须营养素。 　　3、 强化肝功能、调节肾上腺素的分泌。 　　4、 保护皮肤毛囊粘膜及皮脂腺的功能。 　　5、 增强视力 作用机理 　　核黄素即维生素B2与特定的蛋白质结合生成黄酶。黄酶在物质代谢中起传递氢的作用，参与组织的呼吸过程。 　　核黄素的主要生理功用是作为辅酶促进代谢。核黄素和磷酸及一分子蛋白质结合成为黄色酶。这一类酶又叫脱氢酶， 重要的是要非常介导的氢原子转移对糖、脂和氨基酸的代谢 都很重要。它是许多动物和微生物生长的必需因素。 　　为防止核黄素短缺症，应注意保护食物中的核黄素。（吃面条的时候，三分之一到一半的核黄素进入了面汤） ;丙种球蛋白：;性状 冻干制剂应为白色或灰白色的疏松体，液体制剂和冻干制剂溶解后，溶液应为接近无色或淡黄色的澄明液体，微带乳光。但不应含有异物或摇不散的沉淀。 药理作用 注射丙种球蛋白是一种被动免疫疗法。它是把免疫球蛋白内含有的大量抗体输给受者，使之从低或无免疫状态很快达到暂时免疫保护状态。由于抗体与抗原相互作用起到直接中和毒素与杀死细菌和病毒。因此免疫球蛋白制品对预防细菌、病毒性感染有一定的作用 ;实验原理;层析技术的基本原理：利用混合物中各组分的物理、化学性质 的差别，使各组分以不同程度分布在两相(固 定相、流动相)中达到分离。 凝胶层析的原理：分子筛效应 比孔径大的分子不能扩散到孔穴内部， 完全被排阻在孔外，只能在凝胶颗粒外 的空间随流动相向下流??，它们经历的 流程短，流动速度快，首先流出。 较小的分子则可以渗透进入凝胶颗粒内 部，然后再扩散出来，经历的流程长， 流动速度慢，后流出。 ;三、试剂、器材：;实验步骤;（三）上样 先将柱的出口打开，让PBS逐渐流出，待 液面与凝胶床面平齐时，关闭出口（注意： 不可使凝胶柱表面干涸）。 用刻度吸管取样品混合液0.5ml，沿管壁小 心加于柱床表面，打开层析柱出口端，待 样品完全渗入胶内，开始收集流出液，同 时小心加洗脱液（PBS），控制流速：1滴/5-6秒。（注意柱床上要不 断加PBS，保持1cm高水层） （四）洗脱、收集与检测 1、流速1滴/5-6秒不变，2ml/管收集 流出液，收集至流出 液为无色。 2、用分光光度计，在280nm波长处， 以PBS调零，测定无色管吸光度；在 在450nm波长处，以PBS调零，测定有 色管吸光度。（每管收集液稀释1倍 后测定） 3、以管号为横坐标，吸光度为纵坐 标，绘制洗脱曲线。 ;实验注意事项;参考文献;谢谢观看