_免疫检验自动化仪器教程.ppt

1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。 3.按log-logit转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲线拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算出抗原浓度。 （三）方法评价 优点: 灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确 （二）方法评价　 本法敏感度大大高于普通比浊法，可达ng/L水平，操作简便，易自动化；血清中的类风湿因子(RF)可与IgG Fc段结合，使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异性凝集，用F(ab′)2片段代替IgG既可消除此干扰，又可克服IgG致敏胶乳的自凝现象；免疫胶乳轻度自凝或抗体活性降低会严重影响结果。 1. 仪器测定技术要点 (1) 抗原抗体预反应阶段 (2) 反应阶段 (3) 信号检测 　2. 抗原过量检测 　(1) 抗体适当过量 　(2) 对抗原过量进行阈值限定 仪器测定技术要点 开启机器，进行定标 反应阶段 抗原过量检测 (三)方法评价 散射比浊法是目前临床应用较多的一种方法，本法自动化程度高，具有快速、灵敏、准确、精密等优点。采用抗原过量检测方法，保证了结果的准确性。但仪器和试剂价格比较贵, 对抗体的质量要求很高。 　1.抗原抗体比例 　2.抗体的质量 　3.增浊剂的使用 4.伪浊度 5.入射光光源和波长 6.结果报告中的计量单位 7.标准曲线制备与质量控制 　（二）临床应用 免疫比浊分析法主要用于检测免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、κ链、λ链、免疫球蛋白亚类；补体C3、C4；血浆蛋白如前白蛋白(PAB)、白蛋白(ALB)、α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)、β2-微球蛋白(β2-MG)、转铁蛋白(TRF)、铜蓝蛋白(CER)、结合珠蛋白(HP)、，C-反应蛋白(CRP)、载脂蛋白ApoAI、ApoB、脂蛋白(a)、类风湿因子(RF)、尿微量蛋白系列和某些治疗性药物浓度等。 仪器测定技术要点 抗原抗体结合 洗涤、分离 加入氧化剂发光 信号检测 仪器测定技术要点 抗原抗体结合 洗涤、分离 加入AMPPD发光剂 信号检测 时间分辨荧光免疫分析仪是用镧系元素标记抗原或抗体作为示踪物，与时间分辨测定技术结合而制造出来的一种自动化分析仪。荧光偏振免疫测定是一种均相荧光免疫测定法，常采用抗原抗体竞争反应原理，适用于小分子半抗原（如药物浓度）的检测。 全自动酶联免疫分析仪是由多个模块组成，用一台计算机、一套操作系统实现了从标本稀释、加样到酶标板孵育、洗涤、加试剂、再孵育、洗涤、酶标板读数和结果打印自动化。其结果是减轻了劳动强度，缩短了试验时间，提高了工作效率，为全面实现实验室自动化打下了基础。 仪器测定技术要点 抗原抗体结合 电化学发光反应 光信号检测 检测完毕 可用于内分泌激素类、肿瘤标志物类、心肌标志物类、病毒标志物类、治疗性药物浓度、骨代谢指标和贫血类等方面的检测，是目前免疫化学应用最为广泛的新技术。 （二）仪器测定技术要点 　⒈ 抗原抗体结合 　⒉ 加入Eu3+螯合抗体 　⒊ 加入酸性增强液 　4. 信号检测 增强液(enhancement solution)，使Eu3+抗体－抗原复合物的PH值降低至2~3，以利于Eu3+从复合物上完全解离下来，游离的Eu3+为增强液中的另一种螯合剂所螯合，在协同剂等其它成分的作用下，与增强液中的β-二酮体生成一个Eu3+在其内部的保护性胶态分子团，这是一个新的具有高强度荧光的稳定螯合物，它在紫外光的激发下发射很强的荧光，信号的增强效果可达上万倍，该技术使用了解离增强步骤，并且采用了前后两种不同的螯合剂，前一种用于Eu3+与抗体标记，后一种用于与解离下来的Eu3+螯合成新的强荧光发射分子，因此，又将该技术称为解离增强镧系元素荧光免疫(dissociation-enhanced lanthanide fluoroimmunoassay, DELFIA) 　 　1. TRFIA分析用的酸性增强液易受环境、试剂、容器等里面的镧系元素污染，使本底升高，所用试剂和器材应尽量防尘。 　2.TRFIA分析用载体最常用的是聚苯乙烯微96孔板，其荧光本底低，并有洗涤微孔板的自动装置，但不同厂家生产的微孔板，所产生的荧光有很大差异，应选择应用。 　1. 抗原抗体反应 　2.偏振荧光强度测定 　1.FPIA的结果好坏取决于荧光素标记的好坏、激发态荧光的平均寿命、抗原的相对分子量和复合物的特性等因素。 　2.为提高FPIA灵敏度，可用除蛋白剂对标本进行预处理，除去干扰成分。 　5.液路系统 　6.洗板系统 　7. 酶标板读数仪 　8.自动装载传递系统 　9. 计算机管理和