第二章基本技术与技能总结.ppt

下面照片所示2-3-4，可能是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺氏菌？ 15 溶血试验 1、原理： 某些细菌在代谢过程中能产生溶血素，可使人或动物的红细胞发生溶解，不同的细菌有不同的溶血反应，借此可鉴别细菌。 2、试验方法及判断 将培养物接种于血平板培养基上，36±1 ℃培养24～ 48h，观察结果。 （1） α（甲型）溶血：不完全性溶血，血琼脂平板上菌落周围出现较窄的半透明的草绿色溶血环。 （2） β （乙型）溶血：呈完全性溶血，血琼脂平板上菌落周围出现较宽的透明溶血环。 （3）γ（-丙型）溶血：不产生溶血素，血琼脂平板上菌落周围无溶血环。 16 链激酶试验 1、原理： A群链球菌群能产生链激酶，该酶能使血液中的纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶，而后溶解纤维蛋白，使血凝块溶解，为阳性反应。 此试验用于测定链球菌的致病性。阳性反应具有致病性。 2、试验方法及判断 吸取草酸钾血浆0.2 mL（0.01 g草酸钾加5 mL兔血浆混匀，经离心沉淀，吸取上清液），加入0.8 mL生理盐水，混匀后，再加入待检菌36℃下培养18~24h肉汤培养物0.5 mL和0.25％氯化钙0.25 mL，混匀，放37℃水浴中，2 min观察一次。 待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。如2 h内不溶化，继续放置24 h后观察。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。如凝块全部溶化，为阳性＋；凝块24 h仍不溶化，为阴性－。 17 卵磷脂酶试验 1、原理： 某些微生物能产生卵磷脂酶，在钙离子存在时，能迅速分解卵磷脂，生成不溶性甘油酯和水溶性磷酸胆碱，在卵黄琼脂平板上菌落周围形成不透明的乳浊环或混浊白环，或使血清、卵黄液变混浊，以此鉴别细菌。 2、试验方法 将待检菌培养物划线接种或点种于卵黄琼脂平板上，36±1 ℃培养3～ 6h，观察结果。(主要用于厌氧菌的鉴定。产气荚膜梭菌、诺维梭菌产生此酶，其他梭菌为阴性 ) 18 血浆凝固酶试验 1、原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，有两种。 一种存在于细菌细胞壁，直接作用于血浆中的纤维蛋白，使菌体迅速凝结成块（25s内出现结果）。这是玻片法的依据； 另一种是胞外酶，可使血浆凝固酶原，使它成为血浆凝固酶，再使血浆中的纤维蛋白凝固。这是试管法的依据多属致病菌在30min~1h内出现明显凝固，标准要求观察1~6h。 7、明胶液化试验 原理：明胶是一种动物蛋白质，某些细菌具有明胶液化酶，明胶经分解后，可呈现不同的特征，有利于细菌的鉴定。 试验方法及事项：分别穿刺接种被检菌18～24h培养物于明胶培养基，置适温下培养，观察明胶液化状况。(沙雷菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶，而其他细菌很少液化明胶。 ) 培养温度：20~22 ℃培养7~20d；或37℃培养24~48h，4 ℃过夜再观察。（明胶低于20℃凝成固体，高于24℃则自行呈液化状态）。 三、微生物检验中常用的生理生化反应 培养基（明胶培养基）：明胶12～15g，普通肉汤100mL。将明胶加入肉汤内，水浴中加热溶解，调pH至7．2，分装试管，115℃高压蒸汽灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固。 注意：明胶耐热性差，若在100℃以上长时间灭菌，能破坏其凝固性，此点在制备培养基时应注意。 三、微生物检验中常用的生理生化反应 7、明胶液化试验 8、KCN试验 原理：氰化钾可抑制某些细菌的呼吸酶系统。细胞色素、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶均以铁卟啉作为辅基，氰化钾与铁卟啉结合，使这些酶失去活性使细菌生长受到抑制。 三、微生物检验中常用的生理生化反应 8、KCN试验 试验方法 ：用幼龄菌种接种于加氰化钾的测定培养基和未加氰化钾的空白培养基中，适温培养1~2d，观察生长情况。 结果判断：能在测定培养基上生长者，表示氰化钾对测定菌无毒害作用，为阳性。 若在测定培养基和空白培养基上均不生长，表示空白培养基的营养成分不适于测定菌的生长，必须选用其它合适的培养基。 应用：肠杆菌科中的沙门菌属、志贺菌属和埃希菌属细菌的生长受到抑制，而其它各菌属的细菌均可生长。 三、微生物检验中常用的生理生化反应 氰化钾培养基：蛋白胨10g，氯化钠5g，磷酸二氢钾0.225g，磷酸氢二钠5.64g，蒸馏水1000ml，0.5%氰化钾20mL，PH7.6。 制法：将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。放在冰箱内使其充分冷却。每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL(最后浓度为1∶10000)，分装于12mm×