DNA重组及重组DNA技术-2013.ppt

细菌接合 粘性质粒(cosmid) 又称粘粒,是由λDNA的cos区与质粒重新构建的载体,具有质粒相同的结构特点,为双链、环状DNA。其克隆容量可达40-50kb。 下图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因。tetR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在内的多种酶的酶切位点。据图回答： (1)将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有________、_______、_______三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行___________。(2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是________；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物有___________。(3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是______，其合成的产物是_____________。(4)在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是_______