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稀土元素荧光探针分析单链DNA 稀土元素Tb(III)和Eu(III)由于和Mg(II)具有相似的物理化学(电负性)性质，可作为荧光探针研究Mg(II)在生物体的作用及功能。 只有含有鸟嘌呤的核酸才可有效敏化Tb(III)的发光。 Tb(III)与单链核酸特异结合，与EB正好相反。 利用Tb(III)荧光寿命长的性质，使用时间分辨技术，结合DNA杂化技术，在医学诊断方面有广泛的应用前景。 蛋白质研究中的荧光光谱 蛋白质有天然荧光：色氨酸，酪氨酸和苯丙氨酸可发射荧光；由于酪氨酸能向色氨酸发生有效的能量转移，在酪氨酸和色氨酸共存时，观察不到酪氨酸的荧光。 可以利用蛋白质的天然荧光测量蛋白质含量。比紫外法灵敏度高，而且没有核酸的干扰。 利用蛋白质天然荧光的荧光偏振，荧光猝灭和能量转移可对蛋白质与溶剂和小分子（如药物）的作用，蛋白质的结构及其变化进行研究（如蛋白质中不同生色团间的距离）。 荧光探针技术在蛋白质研究有广泛的应用 蛋白质研究中的荧光探针 利用吸附或共价结合在蛋白质等大分子上的染料的荧光特性的变化，推测其所处微环境的变化，即蛋白质的构象变化。这类染料分子种类很多，有不同的应用。 稀土Tb(III)离子可作为探针研究蛋白质中Ca(II)离子结合位置的信息。如金属离子结合部位的环境信息，结合部位与其他生色团间的距离，结合部位距蛋白质表面的距离等。并进一步对蛋白质的构象进行分析。 氨基酸研究中的荧光光谱 荧光方法具有方便，灵敏的特点，为现代氨基酸分析提供了荧光检测手段，使仪器的灵敏度提高2-3个数量级。 20多种常见氨基酸中，只有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸有荧光，强度较弱，直接检测的检测灵敏度低。利用OPA(邻苯二甲醛)，FMOC-Cl(氯甲酸-9-芴甲酯)，DNS-Cl(丹磺酰氯)等荧光衍生试剂对氨基酸进行衍生后，利用色谱或电泳进行分离，可获得极高的检测灵敏度。 免疫分析与荧光标记 放射免疫分析(RIA)将检测放射活性的高灵敏度和抗体抗原反应的惊人特异性巧妙地进行结合，是最早应用和目前应用广泛的免疫分析方法。发明人为此获得1977年的诺贝尔医学奖。 RIA试剂不稳定，有放射性危害的缺点限制了其应用，随后开发的酶免疫分析也具有实际不稳定的缺点，发光免疫分析方法由于试剂稳定，得到越来越多的应用。 生物发光和化学发光方法灵敏度很高，有时甚至可超越酶免疫分析的灵敏度，但重现性较差。 荧光免疫分析中的时间分辨测量 利用具有较长荧光寿命的标记物和时间分辨测量技术可解决荧光免疫分析中背景荧光干扰的问题，是非常活跃的研究领域。 发光免疫分析 免疫反应与特效试剂 抗原与半抗原 半抗原与载体反应 多抗与单抗 免疫分析的分类 免疫分析的发展： 时间分辨免疫分析 多组分免疫分析 纳米标记物的应用 免疫反应与特效试剂 任何脊椎动物体内存在具有免疫识别功能的组织结构。当称为抗原的外源性物质入侵机体后，激活机体免疫系统，机体就会针对性地产生称为抗体的蛋白质。抗体能特异性地识别抗原并与之结合，起到对外源性物质的破坏分解作用。 抗原与抗体的这种反应就是免疫反应，其最大特点就是高度的特异性，及抗体对抗原的特异性识别。 特效试剂（只与一种待测物质反应的试剂）一直是分析化学家追求的目标。而抗体对抗原来说就是特效试剂。 抗原与半抗原 并不是所有的外源性物质都能引起抗体的生成 抗原特指能够刺激动物机体免疫系统产生对应抗体并与之反应的物质，它既具有免疫原性又具有免疫反应性。 仅具有免疫反应性而缺乏免疫原性的小分子物质称为半抗原(hapten)． 免疫原性和免疫反应性 用免疫原性(immunogenicity)和免疫反应性(immunoreactivity)来描述由抗原引起的免疫反应的特性． 免疫原性是指抗原引起免疫应答(immuno response)、产生抗体的能力；物质所属动物种属关系的远近，分子量的大小，分子的化学组成和结构特点等都会影响到物质的免疫原性。 免疫反应性又称免疫特异性(antigen specificity)，是指抗原与免疫应答的产物———抗体，相互起反应的能力 半抗原与载体反应 小分子物质如化学药物、激素、农药、化学试剂、有机试剂等等，它们没有免疫原性，将它们引入动物体，不能诱导产生抗体．但它们能和适当的抗体反应，即有免疫反应性．因此可叫做半抗原 将小分子与具有免疫原性的蛋白质偶联，用偶联后的蛋白免疫动物，获得抗结合蛋白的抗体和抗氨基苯磺酸的抗体．在获得的抗血清中，加人载体蛋白，以沉淀除去抗蛋白的抗体，达到纯化抗半抗原抗体的目的 载体蛋白不仅仅是增加半抗原的相对分子质量，也不是单纯的起运载作用，而是依靠本身的结构特异性——免疫原性，才能诱导体液抗体的产生以及继而诱导对半抗原的识别．这种现象称