论文-董燕-怡瑞胶囊对高脂血症大鼠血清炎性因子及肝脏胆碱能受体a7表达的影响.doc

怡瑞胶囊肝脏α7nAChR表*，王培训1 （1. 广州中医药大学临床药理研究所, 510405广州；2. 无限极（中国）有限公司，529156江门）烟碱乙酰胆碱受体SD雄性大鼠50只，随机分为正常组10 只，喂饲维持饲料；高脂饲料组40 只，喂饲高脂饲料，14d后再分为模型组和怡瑞胶囊低剂量组（140 mg·kg-1）、中剂量组（280 mg·kg-1）、高剂量组（560 mg·kg-1），每组10只。灌胃给药30d，采血分离血清，检测血脂水平、ELISA检测C反应蛋白（CRP）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的水平，免疫组化、RT-PCR检测肝脏组织的α7 nAChR的表达。结果：与正常组比较，高脂血症模型组大鼠血清中炎症因子CRP和TNF-α含量显著升高（P<0.01）α7 nAChR的mRNA表达水平升高（P<0.01）α的水平显著降低（P<0.01）α7 nAChR的mRNA表达水平显著降低（P<0.01）α7 nAChR表达的免疫组化分析结果与RT-PCR结果一致。结论：高脂血症大鼠肝脏组织中α7nAChR的表达升高，怡瑞胶囊降低炎症水平和改善脂代谢的同时可下调α7nAChR的表达。 [关键词] 高脂血症；炎症；烟碱乙酰胆碱受体α（TNF-α）和在机体对感染、损伤以及免疫应答中起重要作用，也是急、慢性炎症反应的主要介导因子[]。α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7 nAChR）是cholinergic anti-inflammatory pathway，CAP）中发挥关键作用的受体，α7 nAChR已成为炎症相关性疾病潜在的药物治疗靶标[3]。α7 nAChR激动剂能降低糖尿病模型小鼠的体重并改善糖、脂代谢[5]。在脂多糖（LPS）刺激的巨噬细胞炎症模型中α7 nAChR的表达升高[6]。而α7 nAChR在肥胖、高脂血症模型动物中的表达变化尚未见报道。 本高脂血症大鼠模型，给予怡瑞胶囊干预通过分析肝脏组织中αnAChR蛋白及mRNA的表达，并观察高脂血症动物血清中炎症因子α（TNF-α）、急性期蛋白C反应蛋白（CRP）的变化，初步探讨其α7 nAChR在肝脏中的表达与高脂血症及炎症的。 1. 材料1.1 动物 SD大鼠5只，SPF级体重150±20）g，雄性，由广东省医学实验动物中心提供，SCXK（粤）2008-0002，饲养于广州中医药大学动物中心SPF级动物房。1.2 药物及相关试剂 怡瑞胶囊丹参、山楂、泽泻、紫苏子油微囊、三七粉、银杏叶提取物无限极（中国）有限公司提供 批号13H21A01A称取胶囊内容物适量，以生理盐水配制成适当浓度的混悬液，4℃保存备用。 高脂饲料由广东省医学实验动物中心加工生产 。配方20.0％蔗糖15％猪油1.2％胆固醇0.2％胆酸钠10%酪蛋白0.6%磷酸氢钙0.4%石粉52.6%维持饲料配制。总胆固醇（TC）检测试剂盒批号2013100036甘油三酯（TG）检测试剂盒批号2013100024低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）检测试剂盒批密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）检测试剂盒批号2013080020均购自南京建成生物工程研究所TNF-α ELISA检测试剂盒批号 E09483-1660购eBioscience公司ELISA检测试剂盒批号：购卡尔文生物科技有限公司α7 nAChR山羊多抗（编号：sc-1447）（购自美国Santa Cruz Biotechnology公司），多聚体抗山羊IgG-HRP两步法组化试剂盒（货号：SV0003）（购自武汉博士德生物工程有限公司），DAB显色试剂盒 （批号:DAB-0031/1031）购自福州迈新生物技术开发有限公司 1.3 仪器5810R 型台式高速冷冻离心机德国Eppendorf公司Synergy HT型多功能酶标仪美国Bio Tek公司微量加样器法国吉尔森公司，PE-9600型PCR仪Singapore公司，DYY-6C型电泳仪（北京六一仪器厂），Tanon-1600凝胶图像分析系统（上海天能科技有限公司），DU series 700紫外可见光分光光度计（Beckman Coulter） 2.1 动物分组及造模给药 适应性饲养周后按体重随机分成2组空白对照组10只给予维持饲料，高脂饲料组40只，给予高脂饲料。2周后，空白对照组和高脂饲料组大鼠不禁食采血，采血后分离血清，测定血清TC，TG，LDL-C ，HDL-C水平。根据TC水平将高脂饲料组大鼠随机分成4组，每组10只。分别为模型对照组，怡瑞胶囊低、中、高剂量给药组分组后各组间比较TC，TG，LDL-C，HDL-C差异均无显著性。 分组后，给药组按低、中、高（140280, 560 mg·kg-1）个剂量每天经口灌胃给药。怡瑞胶囊成人每天的服用量为1400