双水相萃取技术分解.pptVIP

双 水 相 萃 取 技 术 Aqueous Two-Phase Extraction 1. 概述 近年来,由于双水相萃取技术在微生物、有机化合 物和金属螯合物的分离和纯化、预浓缩过程中表现出 相当好的性能,并有望用于大规模提取和纯化生物活性物质,因此越来越受到人们的关注。1896年,Beijerinck 发现,当明胶与琼脂或明胶与可溶性淀粉溶液相混时,得到一个混浊不透明的溶液,随之分为两相,上相含有大部分水,下相含有大部分琼脂(或淀粉),两相的主要成分都是水。这种现象被称为聚合物的不相溶性,由此而产生了双水相萃取。 双水相萃取(Aqueous Two-Phase Extraction，ATPE)是两种水溶性不同的聚合物或者一种聚合物和无机盐的混合溶液，在一定的浓度下，体系就会自然分成互不相容的两相。被分离物质进入双水相体系后由于表面性质、电荷间作用和各种作用力(疏水键、氢键和离子键)等因素的影响，在两相间的分配系数不同，导致其在上下相的浓度不同达到分离目的。 在双水相体系中,常见的水溶性高聚物有:聚乙二醇( PEG)、聚丙二醇、甲基纤维素、聚丙烯乙二醇、吐温、聚氧乙烯类表面活性剂等；聚乙二醇/葡聚糖和聚乙二醇/无机盐是常用的双水相体系,由于葡聚糖价格昂贵,聚乙二醇/无机盐体系应用更为广泛。几种常见的双水相体系列以及成相原理于表1、表2。 表1 常见的双水相系统 表2 双水相体系的分类及成相原理 2. 双水相萃取的理论基础 表面自由能 溶质的分配，总是在互相作用最充分或使系统能量达 到最低的那个相中占优势，依据两相平衡时化学位相等 的原则，可以求得分配系数，服从Brownsredt方程式， ln K=△E/(kT)=M ×λ/(kT) 其中，M为物质相对分子质量；λ为系统的表面特性系数；k为波耳兹曼常数；T为温度。 由于大分子物质的M值很大，λ的微小改变就会引起分配系数很大的变化。故利用不同的表面性质（表面自由能）,可以达到分离各大分子物质的目的。 表面电荷 当盐的正、负离子对上、下两相有不同的亲和力，即正负离子的分配系数不同时，就会在相间产生电位，此电位差的大小为： U2－ U1=[RT㏑(KB Z- ÷ KA Z+ )]/[F(Z+－Z-)] 其中， U1、U2分别表示相1和相2的电位；Z+、Z-分 别表示一种盐的正、负离子价； KB Z- 、 KA Z+分别表示正、负离子在两相的分配系数；F为法拉第常数；R为气体常数；T为温度。带电的蛋白质在两相的相间电位差服从上式。 3. 双水相萃取原理 双水相萃取与一般的水-有机物萃取的原理相似,都是 依据物质在两相间的选择性分配。当萃取体系的性质不同 ,物质进入双水相体系后,由于分子间的范德华力、疏水作用、分子间的氢键、分子与分子之间电荷的作用,目标物 质在上、下相中的浓度不同,从而达到分离的目的。溶质(包括蛋白质等大分子物质、稀有金属以及贵金属的络合物、中草药成分等) 在双水相体系中服从Nernst分配定律: K = Ct / Cb 其中ct 、cb 分别代表溶质在上相、下相中的浓度。 　 系统固定时,分配系数为一常数,与溶质的浓度无关。当目标物质进入双水相体系后,在上相和下相间进行选择性分配,这种分配关系与常规的萃取分配关系相比,表现出更大或更小的分配系数。如各种类型的细胞粒子、噬菌体的分配系数都大于100或者小于0.01,酶、蛋白质等生物大分子的分配系数大致在0.1～10之间，而小分子盐的分配系数在1.0左右，因而，双水相体系对生物物质的分配具有很大的选择性。 水溶性两相的形成条件和定量关系常用相图来表示， 以PEG/Dextran体系的相图为例(见下图),这两种聚合物 都能与水无限混合，当它们的组成在图1曲线的上方时 (用M点表示)体系就会分成两相,分别有不同的组成和密 度,轻相(或称上相)组成用T点表示,重相(或称下相)组成 用B表示。C为临界点,曲线TCB称为结线，直线TMB称为系 线。结线上方是两相区,下方是单相区。所有组成在系统 上的点,分成两相后，其上下相组成分别为T和B。M点时两 相T和B的量之间的关系服从杠杆定律，即T和B相重量之比 等于系线上MB与MT的线段长度之比。 PEG/Dextran体系的相图 4. 双水相萃取体系的特点 ⑴ 整个体系的含水量高(70%～90%)，萃取是在接近生 物物质生理环境的条件下进行，故而不会引起生物 活性物质失活或变性； ⑵ 单