血清总蛋白(TP)的测定及常规实验技术多媒体教学软件的学习.pptVIP

血清总蛋白（TP）的测定及常规实验技术多媒体教学软件的学习 一、原理 二、测定方法 三、参考值 四、临床意义 五、方法学评价 六、注意事项 分光光度测定技术 光线的本质是电磁波的一种，有与电磁波和X线类同的性质。光线有不同的波长，肉眼可见彩色光称为可见光，波长范围在400～750nm，小于400nm的光线称为紫外线，大于750nm的光线称为红外线， T6新世纪紫外可见分光光度计 吸光度测定操作规程 1.将空白液、测定液、标准液分别倒入比色皿中（2/3液量） 2.在主菜单中（光度测量 功能扩展 系统应用），选择“光度测量”按（ENTER）进入“光度测量”（光度测量： Abs nm）界面。 3.在“光度测量”界面按GOTOλ 进入光度测量波长界面，按数字输入波长，按（ENTER）确认。 4.在“光度测量”（光度测量： Abs nm）界面。按SET键进入光度方式界面： ⑴选择“光度方式”按（ENTER）至Abs。 ⑵按下键选试样池菜单，按（ENTER）进入试样室界面，选择试样室后按（ENTER）确认“五连池”； ⑶按下键选择样池数:以（ENTER）至数码“3或2”；按下键选“空白溶液校正”按（ENTER）选“是”。 5.按（RETURN）返回至＂光度测量＂Abs　设定的波长nm界面。按ZERO键消除Ａbs为0.000后，按START/STOP键（两次）测定并读取各管吸光度。 血清总蛋白（TP）的测定一、原理 血清中蛋白质分子的肽键与双缩脲试剂中的Cu++ 结合形成紫色化合物；其色度与总蛋白的浓度成正比，在546波长下进行比色测定。实际上凡是分子内含有两个氨基甲酰基（-CONH2）的化合物，不论直接相连或是通过一个氮或碳原子间接连接，均能与双缩脲试剂发生反应。蛋白质分子内含有许多肽键（-CONH2 ），因此可用双缩脲法作比色测定。但应注意的是不仅仅是（-CONH2）， 凡含-CSNH2、-C（NH）NH2 或-CH2NH2 等基团而具有累似结构的化合物对双缩脲试验亦呈阳性，所以本反应并非为蛋白质所特有。但在体液中，除蛋白质外实际上不存在可与双缩脲试剂显色的物质。各种血浆蛋白质，包括病理的和正常的，呈色的程度基本相同，因此在血浆蛋白的比色测定中，双缩脲反应是比较理想的方法 二、测定方法1、加样： 2、分光光度计测定方法： 波长546nm空白管调零，测定标准管和样品管吸光度值，按公式计算测定结果。 计算公式： （70g/L） 三、参考值： 总蛋白：60~85 g/L 白蛋白：38~48 g/L 球蛋白：22~32 g/L 白蛋白/球蛋白=1.5~2.5/1 四、临床意义： 1、白蛋白/球蛋白=1.5~2.5/1，通过计算其比值可以判定肝脏的功能情况； 2、总蛋白升高：脱水，皮肤大面积烧伤、发烧、腹泻、呕吐。 3、总蛋白降低：大量输液将机体血浆稀释，某些水肿性疾病，长期营养不良和消耗性疾病。 4、球蛋白大量降低：机体免疫功能降低。 五、方法学评价 1.线性范围：0.0~100.0g/L， 2.精密度：批内CV≤2.8%、批间相对极差≤3.3% 3.准确度：准确度≥95% 4.波长546nm 六、实验注意事项 1.样品中总蛋白含量超过100.0g/L，则用生理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。 2.试剂浑浊变色不能用。 3.试剂使用后立即盖紧瓶盖。 * * 当光线通过透明溶液介质时，其辐射能量有部分被吸收，一部分被透过，所以光线射出溶液介质之后光能被减少。例如，可见光透过有色溶液介质之后，或红外线通过多种气体后，均被吸收部分光能，这种光能的吸收的和透过可用于某些物质的定性定量分析。一般应用范围可在测定浓度的千万分之一至百分之一 。 分光分析所依据的定律是Lambert氏和Beer氏定律。 Lambert氏定律 一束单色光通过透明同业介质时，光能被吸收一部分，被吸收光能的量与溶液介质厚度有一定比例关系（见图1-1） 即 ① 式中K为吸光系数，I0为入射光强度，I为通过溶液介质后的光强度，L为溶液介质的厚度。 Beer氏定律的溶液介质浓度变化代替溶液介质厚度的改变，光能的吸收与厚度改变有类同的关系。即一束单色光通过溶液介质时光能被溶液介质吸收一部分，吸收多少与溶液介质浓度有一定比例关系。依据Lambert氏 定律中同