人教版选修1专题四第三课酵母细胞的固定化汇总.ppt

酶和细胞固定方法的选择 ①酶适合采用化学结合和物理吸附法固定 ②细胞适合采用包埋法固定 （1）、方法 （2）、原因 ①细胞个大，酶分子很小 ②个体大的细胞难以被吸附或结合而个小的酶容易从包埋的材料中漏出 3、固定化细胞常用的载体 常用的不溶于水的多孔性载体有哪些？ 明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素、聚丙烯酰胺等 如果反应底物是大分子物质，能否用固定化细胞技术? 为什么？ 那应该采用何种技术? 练习： 1.使用固定化细胞的优点是( )。 A.能催化大分子物质的水解 　 B.可催化一系列化学反应 C.与反应物易接近 　 D.有利于酶在细胞外发挥作用 2.酶的固定方法不包括( )。 A.将酶吸附在固体表面上 B．将酶相互连接起来 C．将酶包埋在细微网格里 D．将酶制成固体酶制剂，如加酶洗衣粉中的酶 3、如果反应物是大分子物质，采用那种方法催化受限制( )。 A．直接使用酶 B．使用化学方法结合的酶 C．使用固定化细胞 D．使用物理吸附法固定的酶 4、下列关于酶和细胞的固定叙述不正确的是( )。 A． 酶分子很小，易采用包埋法 B．酶分子很小，易采用化学结合或物理吸附法固定的酶 C．细胞个大，难被吸附或结合 D．细胞易采用包埋法固定 5. 关于固定化酶的叙述不正确的是 ( )。 A． 既能与反应物接触，又能与反应物分离 B．固定在载体上的酶可被反复利用 C．可催化一系列反应 D．酶的活性和稳定性受到限制 三、实验操作 （一）制备固定化酵母细胞 阅读P50~51思考下列问题： （1）制备过程包括哪几个步骤？ （2）你认为哪个步骤的操作是最重要的一环？ （3）各步骤应当分别注意什么问题？ 1、酵母细胞的活化 思考： 关于酵母菌你有哪些知识？ 什么是活化？ 怎样活化？ 应注意什么？ 活化： 让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态； 本质： 加快新陈代谢； 方法： 加入适量的水。 你能说出理由吗？ 取1g干酵母，放入50ml的小烧杯中，加入蒸馏水10ml，用玻璃棒搅拌，使酵母细胞混合均匀，成糊状，放置1h左右使其活化 思考： 你认为酵母的活化操作有哪些注意事项？ 1、所用容器要大一些； 2、要保证酵母菌的活性； 3、物种要单一； 4、注意水的用量。 2、配制物质的量浓度为0.05mol/L的CaCl2溶液 称取无水Cacl2 0.83g。放入200mL的烧杯中，加入150mL的蒸馏水，使其充分溶解，待用。 3、配制海藻酸钠溶液 操作： 称取0.7g海藻酸钠，放入50mL小烧杯中.加人10mL水，用酒精灯加热，边加热边搅拌，将海藻酸钠调成糊状，直至完全溶化，用蒸馏水定容至10mL。注意，加热时要用小火，或者间断加热，反复几次，直到海藻酸钠溶化为止 加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一环，涉及到实验的成败，一定要按照教材的提示进行操作。海藻酸钠的浓度涉及到固定化细胞的质量。如果海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验效果。 应当注意什么问题？ 4、海藻酸钠溶液与酵母细胞混合 将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入已活化的醉母细胞，进行充分搅拌，使其混合均匀，再转移至注射器中。 为什么海藻酸钠溶液要冷却？ 5、固定化酵母细胞 以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的Cacl2溶液中，观察液滴在Cacl2溶液中形成凝胶珠的情形。将这些凝胶珠在Cacl2溶液中浸泡30 min左右。 你知道还有什么地方可以用到氯化钙？ 刚形成的凝胶珠应在CaCl2溶液中浸泡一段时间，以便形成稳定的结构。 检验凝胶珠的质量是否合格，可以使用下列方法： 一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容易破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。 二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也能表明制备的凝胶珠是成功的。 这一阶段成功与否呢？怎样评价？ 观察凝胶珠的颜色和形状: 如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。 （二）用固定化细胞发酵 1、将固定好的酵母细胞(凝胶珠)用蒸馏水冲洗2-3次。 2、 将150mL质量分数为10%的葡萄糖溶液转移到200mL的锥形瓶中，再加入固定好的