蛋白质双向电泳、westernblot原理、方法、应用汇编.pptVIP

显色反应 一般用ECL发光法 辣根过氧化物酶HRP标记二抗，用底物发光法：将两种显色底物1：1等体积混合后将其覆盖在膜表面使其均匀，用X胶片把膜包起来，马上在暗室中将X光片覆盖在膜的上面（时间根据光的亮度来衡量），显影、定影。 注意：发光法检测的时候曝光时间要恰到好处，过短会导致曝光不彻底， 影响条带亮度，过长会导致荧光信号衰弱，也会使背景颜色加深。 胶条的转移 平衡结束后，先将IPG胶条完全浸末于1×电泳缓冲液中，然后将胶条胶面朝上放在凝胶的长玻璃板上（图4、图5）。 将放有胶条的SDS凝胶转移到灌胶架上，在凝胶的上方加入低熔点琼脂糖封胶液（图-6）。 用镊子、压舌板或是平头的针头，轻轻地将胶条向下推，使之与聚丙烯酰胺凝胶胶面完全接触（图-7）。 放置5分钟，使低熔点琼脂糖封胶液彻底凝固。 胶条的转移 平衡结束后，先将IPG胶条完全浸末于1×电泳缓冲液中，然后将胶条胶面朝上放在凝胶的长玻璃板上（图4、图5）。 将放有胶条的SDS凝胶转移到灌胶架上，在凝胶的上方加入低熔点琼脂糖封胶液（图-6）。 用镊子、压舌板或是平头的针头，轻轻地将胶条向下推，使之与聚丙烯酰胺凝胶胶面完全接触（图-7）。 放置5分钟，使低熔点琼脂糖封胶液彻底凝固。 SDS电泳 1. 在低熔点琼脂糖封胶液完全凝固后。将凝胶转移至电泳槽中。 2. 在电泳