蛋白质相互作用方法汇编.ppt

蛋白质相互作用研究方法简介 基因组序列测定→后基因组研究时代 编码功能蛋白的基因不到三万条 已知蛋白的功能，新基因的功能探索 蛋白质功能研究或蛋白质组学研究 蛋白质相互作用研究方法作为技术平台 蛋白在发挥作用时都不是孤立的， 而是相互联系的 一种蛋白的功能必须借助于其它蛋白的调节或介导。这种调节或介导作用的实现首先要求蛋白质之间有结合作用或相互作用。如果找到与已知蛋白有相互作用的其它蛋白（不管这种蛋白是已知的还是未知的），那么这种已知蛋白的功能研究有可能进入一个新的天地。对于新基因 情况也是如此。 Yeast two-hybrid System 酵母双杂交系统 原理 把报告基因整合到酵母细胞基因组中，并受转录因子 GAL4 的调控表达。一旦 GAL4 蛋白结合到报告基因调控序列相应的位点，则启动其表达。 实际应用中，把 GAL4 基因分成两个部分：DNA结合区（gal4 DNA binding domain, GBD）和激活区(gal4 activating domain, GAD）。分别把 GBD 和 GAD 构建到两个不同的载体上，并能表达相应的两个融合蛋白（GBD-X 和 GAD-Y）。 自激活作用检测： 　GBD-X和GAD 　GAD-Y和GBD 阴性对照 　GBD 和 GAD GBD-IL2和GAD-IL2R（例如）