生理实验02-TTC法测定根系活力+光合因子汇总.pptVIP

* 实验02-1 根系活力的测定(TTC法) 一、实验目的 理解植物根系活力的内涵；掌握TTC法测定根系活力的原理与方法。 * 二、实验原理 氯化三苯基四氮唑（TTC）的标准氧化电位为80mV的氧化还原物质，获得氢的能力强。溶于水为无色溶液，还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲腙 （TTF）。 * 根系活力 生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，可用分光光度法定量测定。 TTC （无色，溶于水） 脱氢酶活性 TTF （红色，不溶于水） 琥珀酸、延胡索酸、苹果酸 丙二酸、碘乙酸 促进； 抑制 * 三、材料、设备与试剂 （一）材料 水培或砂培小麦、玉米等植物的根系。 (二) 仪器设备 1. 分光光度计；2. 分析天平；3. 温箱；4 . 研钵等。 (三) 试剂 1. 乙酸乙酯(分析纯)；2. 次硫酸钠(Na2S2O4)粉末，分析纯； 3. 1%TTC溶液；4. 磷酸缓冲液(1/15mol/L，pH7)；5. 1mol/L硫酸. * 四、实验步骤 1. TTC标准曲线的制作 参考实验指导书操作，并求出回归方程… A485=2.98x + 0.0081 (式中，x：mg) * 2. 样品测定 （1）保温反应 取小麦幼嫩根尖0.2~0.3g —→10mL烧杯 —→加入0. 4%TTC溶液和磷酸缓冲液各5mL ，完全浸没根尖 —→ 37℃下暗保温1～3h —→加入1mol/L硫酸2mL终止反应。 同时做空白试验，即在加入缓冲液后立即加入1mol/L硫酸2mL ，其它操作与样品同。 * （2）样品提取与比色 反应终止后，取出根尖，吸干表面水分—→于研钵中，加约4mL乙酸乙酯充分研磨 —→ “红色物质” 溶于乙酸乙酯 —→分次用乙酸乙酯洗涤，全部转移、定容至10mL。 以空白实验的乙酸乙酯抽提液做空白，在458nm下测定上述样品抽提液的吸光值。 * 五、原始数据 根据样品的A485，参照标准曲线或回归方程先计算出X（mg），然后按下列公式计算根系还原TTC的强度，并代表根系活力。 六、结果计算 TTC还原强度[mg/(g·h)]= X W · t W：样品鲜质量（g）；t：反应时间（h）。 * 七、分析与讨论 结合不同处理下根系活力大小以及反应过程中三苯甲腙在根尖上“着色”部位的差异进行分析。 * 实验02-2 环境因子对光合作用的影响(真空渗入法) 一、实验目的 直观了解光照强度、温度和二氧化碳浓度对光合作用强度（速率）的影响。 * 二、实验原理 真空渗入法可使叶肉细胞间隙充满水分而使叶片下沉。 在光合作用过程中，植物吸收CO2（同化）而放出氧气，由于氧在水中的溶解度很小，所以光合作用的结果，会使得下沉的叶片随其下表面气体（O2）逐渐增加而上浮，根据上浮所需时间的长短，即可推测光合作用的强弱。 * 三、材料、设备与试剂 （一）材料 小白菜叶片 （二）仪器设备及试剂 直径约1cm的打孔器、减压装置（如注射器）、三角瓶、小烧杯、冰浴、光源；无CO2的水、0.5%碳酸氢钠溶液。 * 四、实验步骤 1. 样品准备 选取功能叶片，去中脉—→打取叶圆片约50片—→加水淹没叶片后，放入减压装置，减压至叶片完全下沉（呈半透明状）—→置于暗处备用。 取100mL三角瓶4个，编号，在1号瓶中加入新制的无CO2水40mL，再向2、3、4号瓶中各加入40mL 0.5%的碳酸氢钠溶液。 * 在2号瓶上用较厚白纸遮光，3号瓶放在冰浴中降温至10℃左右，1、2、4号瓶置于20~25℃的环境中。 每瓶各放入下沉叶圆片10片，放在日光或较强灯光下观察各瓶中下沉叶圆片的上浮时间。 * 2. 实验过程观察记录 瓶号 对应处理 各叶片上浮时间（min） 30min上浮叶片数（个） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 CO2 2 弱光 3 低温 4 对照 * 五、结果与分析 以4号瓶为对照，比较CO2多少(1号瓶与4号瓶)、温度高低(3号瓶与4号瓶)、光照强弱(2号瓶与4号瓶)对植物的光合作用的影响。 解释环境因子影响光合作用的原因。 六、讨论 * TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。 *