实验四细菌的变异和致病性.pptVIP

* 实验四 细菌的变异和致病性 一、 观察上次实验结果并记录 二、 细菌的变异 三、 细菌的致病性 实 验 内 容 一、 观察上次实验结果并记录 空气、咽部细菌的分布： 观察并记录菌落数量及特征(大小、颜色、形状、 边缘、表面、结构、透明度、溶血现象) 化学消毒剂的消毒作用 观察并记录皮肤消毒前后菌落数量的变化及比较 皮肤消毒液与碘液的消毒效果 紫外线消毒 观察并记录紫外线消毒特点 二、细菌的变异 实验类型： 验证 实验目的 了解细菌各种变异的机制 了解细菌各种变异的诱导方法 观察细菌各种变异的现象 实验项目 1. 细菌的L型变异(示教) 2. 细菌的鞭毛变异 ——观察变形杆菌的迁徙现象(示教) 3. 细菌的菌落变异(示教) 4. 细菌耐药性变异 ① β-内酰胺酶的测定(操作示教) ② 青霉素酶的测定(操作) 1. L型变异 原 理 细菌在溶菌酶、抗生素(如青霉素)、胆汁等理化因素的作用下，可失去部分或全部细胞壁成份而继续存活，称为L型细菌。G+细菌呈原生质体，G-细菌呈圆球状。 材 料 金黄色葡萄球菌肉汤培养物、L型培养基、新霉素Ⅱ药物滤纸片、革兰染液 方 法 (1)于L型培养基内均匀涂布0.5ml金黄色葡萄球菌肉汤，然后取新霉素Ⅱ药 物滤纸片一张贴于平板中央，37℃培养。 (2)低倍镜下逐日观察滤纸片周围抑菌圈内有无油煎蛋状小菌落(L型菌落) 出现。 (3)取L型菌落和原菌(作对照)涂片，革兰染色后油镜观察。 结 果 (1) 抑菌圈内有油煎蛋状小菌落(L型菌落) (2) L型菌落革兰染色后形态呈多形性 油煎蛋状小菌落 2. 鞭毛变异(H-O变异) 原 理 某些有鞭毛的细菌(如变形杆菌)在一定的环境(如不适宜细菌生长繁殖的理化因素)中生长繁殖，将失去鞭毛，即H-O变异。 材 料 变形杆菌18～24h琼脂斜面培养物、0.1%石碳酸琼脂平板、普通琼脂平板 方 法 取变形杆菌培养物，分别点种于0.1%石碳酸琼脂平板和普通琼脂平板边缘，37℃培养18～24h 结 果 (1) 0.1%石碳酸琼脂平板上变形杆菌只在点种处生长 (2) 普通琼脂平板上变形杆菌呈迁徙性生长 变形杆菌迁徙生长现象 3. 菌落变异(S-R变异) 原 理 某些细菌经人工培养多次传代后由于失去LPS的特异性寡糖重复单位，所形成的菌落由表面光滑、湿润、边缘整齐变为表面粗糙、干燥、边缘不整，即菌落从光滑型变为粗糙型。 4. 细菌耐药性变异 ——β-内酰胺酶的测定 原 理 耐药性葡萄球菌、肠球菌、流感嗜血杆菌、奈瑟菌等可以产生β-内酰胺酶，该酶水解试纸上的产黄头孢菌素（将β-内酰胺环打开）使其形成红色复合物，而使试纸呈红色即为阳性。 材 料 β-内酰胺酶检测纸片，待测细菌的培养物 方 法 用无菌去离子水浸湿纸片，用纸片沾取单个菌落，观察纸片颜色变化。 结 果 纸片呈红色为阳性，1小时后不出现为阴性。 3. 细菌耐药性变异 ——青霉素酶的测定 原 理 耐药性金黄色葡萄球菌能合成青霉素酶，青霉素酶能够水解青霉素为青霉噻唑烯酸，其遇碘氧化，碘被消耗，碘淀粉溶液从淡紫色变成白色。 材 料 金黄色葡萄球菌耐青霉素菌株和敏感菌株的培养物、碘淀粉溶液、载玻片、滴管等 方 法 (1) 取洁净载玻片一张，中间划线，分成实验侧和对照侧。 (2) 两边各加青霉素液一滴。 (3) 用烧灼灭菌的接种环取耐药菌株和敏感菌株，分别与实验侧和对照侧 的青霉素液混匀，使之成为浓稠菌液。 (4) 两边各滴加碘淀粉溶液一滴，混匀观察。 结 果 实验侧很快由紫变白，对照侧仍然为紫色 三、细菌的致病性 实验类型：验证 实验目的 1.掌握外毒素的致病性质及抗毒素的保护作用 2.掌握鲎试验的原理和用途 3.熟悉链激酶试验的原理 实验项目 1. 鲎试验—细菌内毒素的测定(示教) 2. 溶血毒素试验(示教) 3. 卵磷脂酶试验(示教) 4. 观察破伤风痉挛毒素的毒性作用(示教) 1. 鲎试验-细菌内毒素的测定 原 理 鲎为一种海洋生物，其血液中变形细胞含有凝固酶原和凝固蛋白原，内毒素可激活凝固酶原使其成为凝固酶，凝固酶可使可溶性凝固蛋白原成为凝固蛋白而呈凝胶状态。鲎试剂为鲎变形细胞裂解产物，其与待测样品反应，经一定时间后观察试剂的凝固程度，可检测待检物品中有无内毒素存在。 材 料 (1) 试剂：鲎试剂、无热原质的蒸馏水、标准内毒素（大肠杆菌内毒素含量100ng/ml） (2) 器材：无热原质的吸管、37℃水浴箱等 方 法 (1)打开2支鲎试剂安瓿，各加入0.1ml无热原质蒸馏水使之溶解，并编号 (2)于2支安瓿