7可见分光光度法精编.ppt

* 7.5 光度分析法的误差 朗伯-比尔定律的偏离 在吸光光度分析中，经常出现标准曲线不呈直线的情况，特别是当吸光物质浓度较高时，明显地看到通过原点向浓度轴弯曲的现象(吸光度轴弯曲)。这种情况称为偏离朗伯-比尔定律。 若在曲线弯曲部分进行定量，将会引起较大的误差。 由于仪器或溶液的实际条件与朗伯-比尔定律所要求的理想条件不一致引起的。 * 朗伯-比尔定律的偏离 1. 非单色光引起的偏离 理想状态: 单色光, 符合定律 实际情况: 单色器色散能力的限制和出口狭缝需要保持一定的宽度，目前各种分光光度计得到的都是具有某一波段的复合光。 因此：物质对不同波长光的吸收程度不同而引起对朗伯比尔定律的偏离（正负偏离均可能）。 选择性能好的单色器 在被测物质的最大吸收处测定 选择适当的浓度范围 * 2. 介质不均匀引起的偏离 朗伯-比尔定律的偏离 　　被测溶液不均匀，是胶体溶液、乳浊液或悬浮液时，入射光通过溶液后，除一部分被试液吸收外，还有一部分因散射现象而损失，使透射比减少，因而实测吸光度增加，便标准曲线偏离直线向吸光度轴弯曲。 光度法中应避免溶液产生胶体或混浊。 * 朗伯-比尔定律的偏离 3. 溶液本身的化学反应引起的偏离 　　溶液中的吸光物质因解离、缔合、形成新化合物或互变异构等化学变化而改变其浓度，因而导致偏离朗伯—比尔定律。 要控制溶液的条件，使被测组分以一种形式存在 * 朗伯-比尔定律的偏离 4. 显色反应的干扰 　　试样中存在干扰物质会影响被测组分的测定，使标准曲线严重偏离朗伯比尔定律，造成光度分析误差。例如干扰物质本身有颜色或者与显色剂反应等。 要控制溶液的酸度 加入掩蔽剂 改变干扰离子的价态 选择合适的参比溶液 预分离 * 例： 1. 指出下列哪种因素对朗伯-比尔定律产生偏离。 A. 液为稀溶液 B. 入射光为单色光 C. 溶液为胶体溶液 D. 吸收光程长度改变 2. 使用复合光作为入射光时，常会使标准工作曲线发生偏离，其原因？ 3.在符合朗伯比尔定律的范围内，有色物质的浓度、最大吸收波长、吸光度三者的关系正确的是（）。 A 增加 增加 增加 B 减少 不变 减少 C 减少 增加 增加 D 增加 不变 减少 * 吸光度测量的误差 　　在吸光光度分析中，仪器测量不准确也是误差的主要来源。 　　使待测溶液的透射比T在15%~65%之间，或吸光度A在0.2~0.8之间，才能保证测量的相对误差较小。 分光光度计中，为了减少仪器测量的读数误差，一般控制标准溶液和被测溶液的吸光度在什么范围内，如何来实现此目的？ 例： * * 重点 光的基本性质和分区、物质对光的选择性吸收和吸收曲线、光的吸收基本定律——朗伯-比尔定律、偏离比尔定律的因素； 分光光度计的主要部件； 3. 分析条件的选择(显色条件与测量条件). * 物质对光的选择性吸收详见教材 比色法：利用有色溶液对可见光的吸收进行定量测定，具有悠久的历史，称为比色法。随着风光光度计发展，（从可见光到紫外和红外，从混合光吸收到单色光吸收）比色法发展成为吸光光度法。 * 1:0.301;2:10-0.3次方；3： * 1C，3 B * 第7章 吸光光度法Spectrophotometry 7.1 概 述 7.2 光吸收的基本规律 7.3 紫外-可见分光光度计 7.5 光度分析法的误差 7.4 光度分析法的设计 * 光的基本性质 光是一种电磁波，具有波粒二象性(真空速度2.9979×1010cm·s-1)。光子的能量（E）与光的频率（f）及波长（λ）关系如下： E = h? = h (c/ λ) 根据波长或频率排列，得到如表所示的电磁波谱表。 7.1 概述 * 不同类型的光 单色光（monochromatic light）：具同一波长的光。 复合光（multiplex light）：由不同波长组成的光。 紫外光（ultraviolet light）：波长200~400 nm。 可见光（visible light）：人眼能感觉到的光，波长在400 ~ 750 nm。它是由红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种色光按一定比例混合而成的。 波段（wave band）：各种色光的波长范围不同。 互补色光（complementary color light）：按一定比例混合，得到白光（white light）。 * 物质的颜色与光的关系 完全吸收 完全透过 吸收黄色光 光谱示意 表观现象示意 复合光 * 物质的颜色是因物质对不同波长的光具有选择性