改HPLC-2浅析.pptVIP

主讲教师： 袁波 沈阳药科大学药学院 第三节 各类高效液相色谱法 一、液固吸附色谱法（LSC） 二、液液分配色谱法（LLC） 三、化学键合相色谱法（BPC） 四、离子交换色谱法（IEC） 五、空间排阻色谱法（SEC） 六、亲合色谱 七、胶束色谱 八、手性色谱法 液固吸附色谱法（LSC）  liquid solid asorption chromatography 流动相为不同极性的溶剂，固定相为固体吸附剂的 色谱法。 LSC的分离原理 LSC的固定相 LSC的流动相 LSC的优点和应用 LSC的分离原理 分离要求：固定相→吸附剂,多孔极性微粒，表面具活性吸附中心 分离机制：两种“竞争” 1.溶质分子和流动相分子对吸附剂表面 活性吸附中心, “竞争” 2.各组分分子对吸附剂表面活性 吸附中心“竞争” 分离过程：吸附→解吸→再吸附→再解吸 →无数次洗脱→分开 （吸附-解吸附平衡） 注：这种竞争作用形成的吸附-解吸附平衡正是LSC具有选择性分离能力的基础 吸附平衡与吸附系数 注：分离前提——K不等或k不等 而Ka与组分的性质、吸附剂的活性、流动相的性质及温度有关 影响k的因素 色谱柱（S和Vm一定）时，k与固定相性质和流动相性质有关 以硅胶为例1）溶质分子极性↑，与硅胶亲和力能力↑强，k↑，后出柱注：强极性组分后出柱，弱极性组分先出柱 出柱顺序为 饱和烃芳烃有机卤化物硫醚硝基化合物酯≈醛≈酮 醇≈胺砜亚砜酰胺羧酸 2）溶剂系统极性↑，洗脱能力↑，k↓， tR↓注：调节溶剂极性，可以控制组分的保留时间 LSC的固定相 LSC固定相分类 LSC常用固定相 硅胶的结构和特点 硅胶含水量对色谱分离活性的影响 LSC固定相分类 （1）极性 硅胶、硅酸镁（酸性）； 氧化铝、氧化镁（碱性） 分子筛 （2）非极性 高分子多孔微球（GDX）：苯乙烯—二乙烯苯共聚物 高强度多孔微粒活性碳 多孔石墨化碳黑 碳多孔小球（TDX） 表征固定相性质的参数 LSC常用固定相——硅胶 LSC常用固定相——高分子多孔微球 苯乙烯与二乙苯交联聚合物 国产YSG 日立3010胶 原理：吸附 + 分配 + 小孔径凝胶 特点：柱选择性好，峰形好，但柱效低 适用：分离弱极性化合物 例：日立3010胶 硅胶结构和特性对色谱分离的活性影响 含水量对硅胶吸附活性影响 硅胶含水量较小——吸附色谱 硅胶极性较大 （微量水分——减尾剂） 硅胶含水量17%——分配色谱 硅胶失活→仅为载体 吸附的水→固定液 LSC的流动相选择 对流动相的要求 流动相的组成 LSC中使用混合溶剂的优点 对流动相的要求： 1.与固定相不互溶 以保持色谱柱稳定性 高纯度溶剂 以防止微量杂质在柱中沉积引起柱子性能改变 选用溶剂与检测器匹配 UVD不可选具有UV吸收的溶剂 RID不可选溶剂梯度洗脱 对样品溶解力强 以提高测定的灵敏度 低粘度和低沸点 以减小液相传质阻力、提高柱效 和易于除去溶剂、利于样品纯化和制备 避免具有显著毒性的溶剂 以保证操作人员安全 溶剂的强度参数ε0反映各种溶剂在吸附剂上的相对极性大小。目前，寻找一种合适流动相，对未知样品分离仍需采用尝试的方法。 首先，选用中等强度的溶剂 续-- 流动相的组成 极性固定相（硅胶或氧化铝）：选择己烷、庚烷等弱极性溶剂作底剂 + 二氯甲烷，氯仿，乙醚，异丙醚等中等极性溶剂作改性剂 或 + 四氢呋喃，乙腈，异丙醇，甲醇，水等极性溶剂作改性剂 例：正己烷或庚烷 + 氯仿，二氯甲烷，乙醚 非极性固定相： 苯乙烯-二乙烯苯共聚物微球、 石墨化碳黑微球 选择水、甲醇、乙醇 作底剂 + 乙腈，四氢呋喃作改性剂 LSC中使用混合溶剂的优点 1）溶剂强度随组成连续变化 2）可以使流动相保持较低粘度，以降低柱压，保持