自噬与凋亡总结.docVIP

两种细胞程序化死亡中的细胞骨架引言 细胞程序化死亡(programmed cell death)是当今最热门的研究课题之一。它不同于细胞坏死，是细胞接受指令后的主动死亡，属于安乐死。动物机体靠细胞增殖和细胞周期的正负调控以及对编程细胞死亡的正负控制来维持细胞总数的平衡和机体的生命活力。２００2年诺贝尔生理学或医学奖授予英国科学家悉尼·布伦纳、约翰·苏尔斯顿和美国科学家罗伯特·?霍维茨，以表彰他们在器官发育及细胞程序化死亡的基因调节方面做出的贡献。 过去十年来，对细胞程序化死亡的研究已经在引起死亡的活性因子、死亡期间细胞间的变化等方面取得了很大的进展。直至现在，根据形态以及生化的证据可发现细胞程序化死亡有几种亚型。研究较多的有：细胞凋亡（apoptotic），又叫第一类细胞程序化死亡；细胞自噬性死亡（autophagic cell death），又叫第二类细胞程序化死亡。最近有研究发现，细胞骨架的成分，如胞质角蛋白（cytokeratin）及F-肌动蛋白（ F-actin）在这两种细胞程序化死亡中有着很大的区别，推测这两种死亡方式有着不同的本质。 本次报告结构一 细胞凋亡与自动吞噬死亡二 对细胞自噬性死亡中的细胞骨架成分的实验方法三 对细胞凋亡中的细胞骨架成 分的实验方法四 小结五 比较讨论与分析 一 细胞凋亡与细胞自噬性死亡细胞凋亡（apoptosis）细胞凋亡（apoptosis）是传统意义上的细胞程序化死亡，在细胞中主要执行两种功能：1.对无用的细胞进行消除，如组织萎缩和退化。2.作为对抗疾病的方式，如清除癌细胞、被毒害了的细胞。形态学特点1、胞质胞核内的染色体凝集浓缩2、形成死亡小体3、细胞器保存完好4、不存在大量吞噬泡细胞自噬性死亡近年来，在大量的生物体中发现一种存在有大量的吞噬泡的细胞程序化死亡方式，有足够的证据表明，这是细胞程序化死亡。这是一种在某种生理或疾病时期出现的细胞死亡方式。已经在菌类，昆虫变态过程中，哺乳动物胚胎发育中的趾间蹼退化，乳腺停止分泌乳汁等过程中，还有在一些疾病中，例如老人痴呆症（Alzheimer’s disease）和帕金森氏症（Parkinson’s disease ）中，都发现有这种细胞程序化死亡方式。功能1、细胞营养缺乏时营养的动员2、细胞间分化3、细胞死亡及老化4、阻止癌症的发生形态学特点1、高尔基体和内质网等细胞器膨胀2、胞质无定形核碎断，固缩3、有大量吞噬泡4、细胞膜冒泡5、形成的吞噬泡是由光面内质网包围将要被吞噬的底物，随后与初级溶酶体结合形成，可用单丹磺酰尸胺（monodansylcadaverine MDC) 染色检测出来。两者关系 ? 形态学与生化上有不同。 ? 两者可在同一组织中出现，死亡方式的选择由一种基因表达决定。 ? 研究表明，在这两种死亡过程中细胞骨架存在很大差别。 ? 细胞骨架的成分胞质角蛋白和F-肌动蛋白在细胞凋亡过程中很快断裂，而在细胞吞噬死亡过程中仍大部分保存完好。二 对细胞自噬性死亡的研究方法 材料：人乳腺癌细胞（MCF-7）方法：1.用三苯氧酚（tamoxifen TAM）诱导培养细胞，产生细胞自噬性死亡。2.透射电镜观察细胞形态。3.用单丹磺酰尸胺（monodansylcadaverin MDC）染色观察自动吞噬泡。4.用免疫及组织化学方法分别观察细胞核形态（用H33258染色）、胞质角蛋白（用anti-cytokeratin染色）、F-肌动蛋白（用phalloidin 鬼笔环肽染色）。5.Western blot电泳（荧光染色）。 透射电镜下观察到的细胞形态对照细胞：箭头所指为线粒体三角形所指为多聚核糖体横线表示1微米双箭头所指为自动吞噬泡（AV）左图：10-6M TAM 168h（7d），可见大量自动吞噬泡，染色体与对照比，有轻微凝缩。右图： 10-6M TAM 168h（7d），胞质无定形，线粒体聚集成簇，可见吞噬泡，凝缩的核与核膜分离位于核中央10-6M TAM 168h（7d）用单丹磺酰尸胺（monodansylcadaverin MDC）染色观察自动吞噬泡。 左上图：对照左下图：所指为自动吞噬泡免疫及组织化学染色观察10-6M TAM 168h（7d） A图：所指为凝缩的细胞核。B图：A图所指的核周围的胞质角蛋白成点状。C图：所指为凝缩的细胞核。D图：A图所指的核周围的F-肌动蛋白呈放射状，一直延伸到质膜。Western blot电泳（荧光染色）上图：对于胞质角蛋白对照组显示典型的区带处理组第三日开始在CK18和CK19之间有弱区带出现，但直到第七天才明显 下图：对于肌动蛋白总量对