微生物的生长及其控制解答.pptVIP

第八章 微生物的生长及其控制 个体生长一个体繁殖一群体生长 群体生长=个体生长+个体繁殖 第一节 测定生长繁殖的方法 （一）直接法 1、? 测体积；这是一种很粗放的方法，用于初步比较用。 2、? 称干重：可用离心法或过滤法测定，一般干重为湿重的10%-20%。 （1）?????? 离心法： （2）?????? 过滤法: （二）间接法 1、比浊法 （1）采用McFarland比浊管进行测定。 这是用不同浓度的BaCl2与稀H2SO4配制成的10支试管，其中形成的BaSO4有10个梯度，分别代表10个相对的细菌浓度(预先用相应的细菌测定)。 （2）采用分光光度计进行测定。 在可见光的450～650nm波段内均可测定．为了对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪，可采用不必取样的侧臂三角烧瓶来进行．测定时，只要把瓶内的培养液倒人侧臂管中；然后将此管插入特制的光电比色计比色座孔中，即可随时测出生长情况，而不必取用菌液。 2、生理指标法： （1) 测含氮量： 根据其含氮量再乘以6.25，即可测得其粗蛋白的含量(因内中包括了杂环氮和氧化型氮)。 此法只适用于细胞浓度较高的样品，同时操作过程也较麻烦，故主要用于科学研究。 (2)测含碳量 ： (3)其他： （三）测定微生物生长量应用举例 举例：可以通过细菌生长的快慢来判断某一条件是否适合。 二、计繁殖数 1、涂片染色法 其计算公式如下： 每毫升原菌液含菌数=视野中的平均菌数X1平方厘米/视野面积X100X稀释倍数 2、比例计数法 3、? 血球计数板法 计数室的总面积为1平方毫米，高0.1毫米，并具有一定刻度。 、 4、电子自动计数器计数法 （二）间接法；又叫活菌计数法 1、? 平板菌落计数法 可用倾注或涂布平板等方法进行。此法适用于各种好氧菌或厌氧菌。 一般操作为： 倾注法：10X稀释 1毫升； 涂布法：0.1毫升 1、2、3个平板累加（防止涂布器沾细胞） 此法是教学、科研、生产中最为常用的一种活菌计数法。但这种方法在操作时较烦琐且要求操作者技术熟练。其中最重要的是应使样品充分混合，并让每支移液管只能接触一个稀释度的菌液。其误差来源主要在于稀释和培养基温度。 为克服此缺点，国外已出现多种微型、快速、商品化的用于菌落计数的小型纸片或密封琼脂板，其主要原理是利用加在培养基中的活菌指示剂TTC(2，3，5—氯化三苯基四氮唑)，它可使菌落在很微小时就染成易于辨认的玫瑰红色。 2、厌氧菌的菌落计数法 一般可用亨盖特滚管培养法进行 。 滚管技术的优点是：试管内壁上的琼脂层有很大的表面积可供厌氧菌长出单菌落，但试管口的面积和试管腔体积都极小，因而特别有利于阻止氧与厌氧菌接触。 小结： 以上介绍了若干测定微生物的生长量或计算繁殖数的主要方法。其中最常用的为称干重、测浊度（用分光光度计）、测含氮量、血球计数板法测总菌数以及用平板菌落计数法测活菌数等方法。必须指出的是：无论采用什么方法都有其优点和使用范围。所以，在使用前，一定要根据自己的研究对象和研究目的的不同，选用最合适的方法。 ? 第二节 微生物的生长规律 一、微生物的同步生长 （一）相关定义 1、同步培养法：能使培养的微生物处于比较一致的生长发育在同一阶段上的培养方法，称同步培养法。 2、同步生长：通过同步培养，而使细胞群体处于分裂步调一致的状态，就称同步生长。 3、同步培养物：用同步培养法而得到的培养物。 （二）获得同步培养物的方法 1、环境条件诱导法 （1）温度 通过适宜与不适宜温度的交替处理之后可获得同步细胞。 （2）培养基成分控制 ①??? 通过营养成分 ?②通过抑制生物大分子合成的化学物质 （3）其他 ①??? 对于光合细菌 ②??? 对于不同步的芽孢杆菌 2、机械筛选法 （1）离心方法 （2）过滤分离法 将不同步的细胞培养物通过孔径大小不同的微孔滤器，从而将大小不同的细胞分开，分别将滤液中的细胞取出进行培养，获得同步细胞。 （3）硝酸纤维素 滤膜洗脱法 二、单细胞微生物的典型生长曲线（群体生长规律） （一）生长曲线的定义 定量描述液体培养基中微生物群体生长规律的实验曲线，称为生长曲线。 （二）典型生长曲线 1、延滞期 （1）特点 ①生长速率常数等于零。 ②细胞形态变大或增长。 ③细胞内RNA尤其是rRNA含量增加，原生质呈嗜碱性。 ④合成代谢活跃，核糖体、酶类和ATP的合成加快，易产生诱导酶。 ⑤对外界不良条件如氯化钠溶液