第六章免疫标记技术解答.pptx

免疫标记技术 经典免疫学技术 沉淀反应 凝集反应 补体参与的抗原抗体反应 中和反应 沉淀反应 凝集反应 补体参与的抗原抗体反应 中和反应 经典免疫学技术的不足 灵敏度 周期长 可重复性 无法定量 无法定位 特异性差 关键问题 免疫标记技术（immunolabelling technique） 用荧光素、放射性同位素、酶、发光剂或电子致密物质等作为示踪剂，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。 免疫标记技术 分类：免疫酶技术(ng)、放射免疫技术(pg)、免疫荧光技术、免疫电镜技术、免疫胶体金技术、发光免疫测定。 特点：高度灵敏、特异、快速，定性、定量、定位 第八章 免疫标记技术 第一节 放射免疫技术 第二节 免疫荧光技术 第三节 酶免疫技术 第四节 其他免疫标记技术 第八章 免疫标记技术 第一节 放射免疫技术 第二节 免疫荧光技术 第三节 酶免疫技术 第四节 其他免疫标记技术 一、放射免疫技术 二、免疫放射技术 第一节 放射免疫技术 一、放射免疫技术 二、免疫放射技术 第一节 放射免疫技术 （一）放射免疫技术的原理 （二）放射免疫技术的基本条件 （三）放射免疫技术的基本类型 一、放射免疫技术 （一）放射免疫技术的原理 （二）放射免疫技术的基本条件 （三）放射免疫技术的基本类型 一、放射免疫技术 放射免疫技术（radioimmunoassay，RIA） （1977年获诺贝尔生理和医学奖） 放射免疫技术的原理 RIA是以放射性同位素标记抗原的一种竞争性免疫抑制试验 （一）放射免疫技术的原理 （二）放射免疫技术的基本条件 （三）放射免疫技术的基本类型 一、放射免疫技术 （二）放射免疫技术的基本条件 1．抗原标准品与待测抗原 2．放射性同位素 3．特异性抗体 4．常用的同位素标记方法 5．B与F的分离技术 1．抗原标准品与待测抗原 标准品是放免技术的定量依据 标准品：与待测样品的化学结构完全相同 替代品：与待测样品的结构相似，但要与抗体的亲和力相近，应列出与真标准品的换算系数。 2. 放射性同位素 3. 特异性抗体 放射免疫技术的抗体应具备： 特异性高、亲和力高（平衡常数K值大）、效价高 （即抗血清高度稀释时仍能迅速与抗原结合，极少解离，保证检测的灵敏度） 4. 常用的同位素标记方法 氯胺T氧化标记法 乳过氧化物酶标记法 半抗原标记法 5. B与F的分离技术 （1）双抗体沉淀分离法 （2）化学试剂分段沉淀分离法 （3）固相法 （4）吸附法 结合态标记抗原B与游离态标记抗原F能否有效地分离是放射免疫技术的一个重要环节。 分离剂的要求 能使B和F完全分离 不受外界因素的干扰 与游离抗原的非特异性作用尽可能小 操作简便、分离迅速、重复性好 来源广，经济，便于使用 （1）双抗体沉淀分离法 优点： 本法操作简便、稳定 缺点： 易受免疫反应液中其他蛋白质或盐的干扰，使非特异性吸附有较大变异，且第二抗体消耗量大。 加入第二抗体使微量抗原抗体复合物的分子加大，从而使原来不能用普通离心法沉淀的抗原抗体复合物易于沉淀而分离。 （2）化学试剂分段沉淀分离法 利用盐类或有机化合物使反应液中的-球蛋白在等电点沉淀，从而达到分离的目的。如：聚乙二醇（PEG）、硫酸铵等 优点： 试剂来源广泛、 价格便宜 缺点： 影响因素多（温度、pH值、浓度等） （3）固相法 将测定用的第一抗体（或第二抗体）牢固地结合于固相载体表面，相应抗原（或第一抗体）经温育被吸附，只要将固相表面洗涤即将B和F分离。 优点：操作简便、快速 新的固相分离方法： 纤维固相抗体竞争法 可磁化颗粒固相抗体竞争法 试管固相法 （4）吸附法 本法多用于小分子半抗原的放射免疫分析。 如：活性炭、硅镁吸附剂、滑石粉等 性质：对蛋白质、多肽、药物等具有非特异性 吸附的能力 应用：在其表面包被一层白蛋白或右旋糖苷等 物质时，将会限制大分子物质的吸附。 沉 淀 中：吸附有游离的抗原或半抗原 上清液中：抗原抗体复合物 优点：操作简便、分离迅速 缺点：专一性不强 （一）放射免疫技术的原理 （二）放射免疫技术的基本条件 （三）放射免疫技术的基本类型 一、放射免疫技术 （三）放射免疫技术的基本类型 1．液相法 （1）平衡法（又称一步法） （2）顺序加样法 2．固相法 （1）竞争法 Ag+Ag*+Ab- （2）改良法 Ag+Ag*+Ab+AntiAb- 一、放射免疫技术 二、免疫放射技术 第一节 放