第三章紫外可见-分子荧光_仪器1研究.ppt

　紫外-可见分光光度法 （Ultraviolet-Visible (UV-Vis) spectrophotometry ） 郭一霏 方法特点 基于物质吸收紫外或可见光引起分子中价电子跃迁、产生分子吸收光谱与物质组分之间的关系建立起来的分析方法，称为紫外可见分光光度法（UV-vis）。 1.用于无机物和有机物的定量分析，也可以进行有机物的定性及结构分析 2.较高的灵敏度（10-4～10-7g·mL-1）和较高准确度，选择性好 3.仪器操作简单快速，应用广泛 主要内容 一 概述 1.1 电磁辐射的选择吸收　　 　　 当光照射到物体上，光与物质发生相互作用，产生反射、散射、吸收或透射，对于均匀物体，光的散射可忽略． 　　　一束光通过某一有色溶液，一些波长的光被溶液吸收，另一些波长的光则透过．透过光或反射光刺激人眼而使人感觉到颜色存在． 可见光：400-750nm； 溶液的颜色由透射光波长决定； 物质呈现的颜色是物质对不同波长的光选择性吸收的结果．如CuSO4溶液，吸收白光(复合光)中的黄光而呈蓝色． 单色光，复合光，互补色光 物质颜色与吸收光颜色的互补关系 　　　　　　　　　吸　收　光 物质颜色　　 　颜　色　　　　波长/nm　 　黄绿　　　　　　紫 400~450　　　　 　黄　　　　　　　蓝 450~480 　橙　　　　　　绿　蓝 480~490 　红　　　　　　蓝　绿 490~500 　紫红　　　　　　绿 500~560 　紫　　　　　　黄　绿 560~580 　蓝　　　　　　　黄 580~600 　绿蓝　　　　　　橙 600~650 　蓝绿　　　　　　红 650~780 1.2 分子吸收光谱的产生 在分子中，除了电子相对于原子核的运动外，还有核间相对位移引起的振动和转动．这三种运动能量都是量子化的，并对应有一定能级． 若用△Ee,△Ev,△Er分别表示电子能级、振动能级转动能级差，即有△Ee?△Ev ? △Er．分子跃迁时，分子中总的内能变化： E分子 = △Ee + △Ev + △Er 一 概述 1.3 吸收的本质--选择性 当入射光子的能量等于吸光物质的基态和激发态能量之差时才会被吸收． 由于物质的分子（或离子）只有有限数目的量子化能级，所以物质对辐射的吸收是有选择性的．与光子碰撞发生能量转移： 　M + hv M* 基态　　　 激发态 由于分子中的量子化能级是有限的，不同的物质微粒由于结构不同而具有不同的量子化能级，能级差不同，因此物质对光的吸收具有选择性． 被激发的粒子在10-8s后又回到基态，并以热的形式或荧光等形式释放能量 一 概述 1.4 吸收曲线 １定义： 　　　将不同波长的光透过某一固定浓度和厚度的有色溶液，测量每一波长下对光吸收程度，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，这种图谱称为该物质的吸收曲线． 　　　描述了物质对不同波长光的吸收能力． ２特征 不同浓度的同一物质，在吸收峰附近，吸光度随浓度增加而增大，但最大吸收波长不变． 在最大吸收波长处测定，灵敏度最高． 吸收曲线是光度法中选择测定波长的重要依据． 　　KMnO4溶液的最大吸收波长为525nm, 吸收黄绿色的光，呈现紫红色． 定性分析与定量分析的基础 透过光的强度(Ⅰt)和入射光强度(Ⅰo)之比称为透光度（T)： T=Ⅰt / Ⅰo 为表示物质吸收光的程度引入吸光度(A)概念： 2.2 朗伯比尔定律 朗伯定律（1760年）：光吸收与溶液层厚度成正比 比尔定律（1852年）：光吸收与溶液浓度成正比 当一束平行单色光垂直照射到任一均匀非散射的含有吸光物质介质时，吸光度与吸光物质的浓度及吸收层厚度成正比——朗伯比尔定律 数学表达：A＝lg(1/T)=Kbc 其中，A:吸光度，T:透射比， K:比例常数，b:溶液厚度，c:溶液浓度 k与物质