专题2_微生物的培养与应用复习答案.ppt

专题2 微生物的培养与应用; 一、微生物的培养与应用 1.微生物的实验室培养 (1)培养基 ①概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求, 配制出供其生长繁殖的营养基质。 ;②分类 a．按培养基的物理性质可以分为液体培养基 和固体培养基。 b．按培养基的用途可以分为选择培养基和鉴 别培养基。;;;【特别提醒】 选择培养基一般只生长具有特定目的的微生物，鉴别培养基可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。 ; ; ③培养基配方及营养要素 基本营养要素： 各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐 此外还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。; 无菌技术主要操作要求 a．实验前应对操作空间、操作人员消毒，对所用器具和培养基灭菌。 b．实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作，另外要避免已灭菌处理材料再次污染。 ;（1）消毒和灭菌的区别;培养基; 2．纯化大肠杆菌以及菌种的保藏 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基： 计算、称量、溶化、 、倒平板。;(2)纯化大肠杆菌 ①原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 ;(2)纯化大肠杆菌 平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面； 稀释涂布平板法:将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。; （2）接种操作: 第一步:灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微 生物污染培养基； 每次划线前:灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后， 接种环上残留的菌种，使下一次划线时， 接种环上的菌种直接来源于上次划线的末 端，从而通过划线次数的增加，使每次划 线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落 划线结束后:灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的 菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 ; (3)菌种的保藏 ①短期保存：固体斜面培养基上4 ℃保存，菌种 易被污染或产生变异。 ②长期保存：－20 ℃甘油管在冷冻箱中保藏。 ; 二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数;2．分离分解尿素的细菌所使用的特定培养基 培养基:选择培养基，培养基中的氮源只有尿素，理论上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生长。 KH2PO4 1.4 g Na2HPO4 2.1 g MgSO4·7H2O 0.2 g 葡萄糖 10.0 g 尿素(惟一氮源) 1.0 g 琼脂 15.0 g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000 mL。;3．统计菌体数目的方法 (1)显微镜直接计数法 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。 ②方法：用计数板计数。 ③缺点：不能区分死菌与活菌。 (2)间接计数法(活菌计数法) ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。; 【例2】可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是(　　) A．以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂 B．以尿素为惟一氮源的培养基中加入二苯胺试剂 C．以尿素为惟一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂 D．以尿素为惟一氮源的培养基中加入双缩脲试剂 ; 三、分解纤维素的微生物的分离 (1)实验原理 即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。; (2)实验流程 土壤取样：富含纤维素的环