HCMV-pp65分解.pptVIP

应用免疫荧光技术检测外周血白细胞内HCMVpp65抗原 ;临床意义 :;优势:;检测人群：;检验原理;试验步骤;二.白细胞滴片的制备 细胞计数板计数并调整白细胞浓度至4×106/ml 取出经多聚赖氨酸处理的载玻片.编号.滴片.干燥 固定液固定WBC，室温10分钟 PBS洗涤玻片3分钟/次，3次 立即染色 ;三.染色 每个WBC滴片滴上一滴1抗，阴阳性对照片同时滴加。 玻片放入湿盒，并将湿盒放入37℃恒温箱30分钟 取出玻片在PBS中浸泡洗涤3分钟3次 于WBC滴片上滴加一滴荧光素标记的2抗，放入湿盒，37℃恒温箱，3分钟。 取出玻片轻轻洗涤玻片3分钟，3次。 蒸馏水洗涤玻片3次；吸干； 甘油封片； 在40倍荧光显微镜下观察实验结果。;四.结果的判定;（二）阴性结果及细胞判定标准;（三）阳性结果及细胞判定标准;五、标本读片时视野较暗无法分辨细胞形态时应注意以下问题：;六、标本中杂质的区分;观察杂质形态多数杂质为不规则或呈椭圆行与正常细胞较易区分 杂质在荧光照射下发出明亮的绿色荧光 难以明确其是否为杂质时可打开显微镜光源并上下调整微调，杂质有明显的折光性，细胞折光性较弱。 个别标本中含有微小的液滴，其形态、大小与细胞较一致也发出暗绿色荧光不易与阳性细胞区分时，注意观察其形态为正圆形，着色均匀，且无法看清细胞核内物质，核周围无暗红色区域，在标本区域外也可看见相同物质。 ;七、细胞非特异性着色的鉴别 ;标本周围靠近画圈边缘的细胞着色，但标本中央部分的细胞阴性时，周边细胞多为非特异性着色，可能与免疫组化染色边缘效应道理一致。 细胞过厚或细胞成片时部分细胞非特异性着色。可能由于细胞过厚荧光标记素洗脱不净造成。细胞着色可表现为核周着色，全细胞着色或细胞部分着色，有时细胞中央可出现点状不着色区，此时不易于其内是否掺杂特异性着色细胞区分，应注意观察周围散在分布细胞的着色情况。 在较大杂质周围的细胞非特异性着色。应注意观察周围散在分布细胞的着色情况。 部分细胞集落性分布呈非特异性着色，由于操作方法为细胞悬液滴片，故阳性细胞应散在分布而不应呈集落性分布，此时细胞着色不应视为???型阳性细胞。应注意观察周围散在分布细胞的着色情况。;以上各种现象可在同一标本中同时出现。假阳性着色有时极难与典型阳性细胞区分，诊断时应结合病人的病史、临床症状、既往检测结果及其它相关化验检查综合分析，不要轻易诊断为阳性，给病人造成不必要的经济负担，及应用各种抗病毒药物后产生的不良反应。必要时可通知临床再次送检。;七、抗病毒药物对细胞着色的影响;综上所述，人巨细胞病毒（HCMV）的低基质磷酸化蛋白（pp65）抗原血症检测对巨细胞病毒感染有较好的诊断价值。但做出正确诊断时应首先保证操作规范，其次认真阅读每一标本，密切结合临床。当不能明确诊断时，应结合患者临床症状及相关实验室检查，认真分析后判定结果。