灵芝三萜酸、喜树碱、人参皂苷合成及调控基因的筛选、克隆与功能分析.pdf

目录 目 录 摘 要…………………………………………………………………………………．．I Abstract…………………………………………………………………………………………………………．III Abbreviation……………………………………………………………………………………………………VI 第一章文献综述………………………………………………………………………l 第一节药用植物转录组研究方法……………………………………………………2 1．1转录组研究技术方法及应用………………………………………………………2 1．2药用植物EST测序平台选择……………………………………………………．3 第二节EST与高通量测序技术结合在中草药基因研究中的应用…………………5 第三节NCBI的EST数据现状………………………………………………………6 第四节灵芝、喜树、西洋参研究进展………………………………………………6 4．1喜树碱相关研究进展……………………………………………………………．．7 4．2灵芝相关研究背景………………………………………………………………13 8 4．3西洋参研究进展…………………………………………………………………l 第五节本研究的目的和意义………………………………………………………．20 第二章喜树转录组测序及喜树碱合成、转运基因的发掘………………………．2l 研究简介………………………………………………………………………………2i 第一节材料和方法…………………………………………………………………．22 1．1植物材料准备和处理……………………………………………………………22 1-2 RNA的提取和cDNA合成………………………………………………………22 1．3454文库构建、测序和注释…．．，．………………………………………………～23 1．4基因克隆和分析…………………………………………………………………24 1．5实时荧光定量PCR………………………………………………………………27 第二节研究结果……………………………………………………………………．29 2．I454测序和EST拼接……………………………………………………………，29 2．2注释和分类………………………………………………………………………29 2-3喜树碱生物合成和转运的候选基因……………………………………………34 第三节讨论………………………………………．．．．………………………………47 3．1异胡豆苷合成基因的克隆和分析……………一………………………………～48 3．2喜树碱合成下游途径候选基因的发现…………………………………………．48 3．3菩树碱转运基因的发现………………………．．．．………………．．．．…～………49 第j誊赤芝子实体转录组数据初步分析…．．．．……………………．，……………．50 研究简介…………………………………………………～…………………………50 第一书材料和方法………～………………………………………．．．……………．50 l+l生物材米札……………………………………………………………………………．．．……．．……～…50 目录 1．2RNA提取和cDNA合成…………………………………………………………50 1-3测序文库的构建、测序、拼接和注释…………………………………………51 第二节研究结果……………………………………………………………………．51 1 2．1数据拼接与基因注释……………………………………………………………．5 2．2三萜灵芝酸骨架合成基因………………………………………………………．51 2．3参与灵芝酸合成的下游基因搜索………………………………………………52 2．4参与木质素降解的候选基因……………………………………………………．53 第三节讨论…………………………………………………………………………57 第四章西洋参转录因子PqWRKYI基因功能研究………………………………．58 研究简介………………………………………………………………………………58 第一节材料和方法…………………………………………………………………．58 1．1生物材料和载体…………………………………………………………………58 1．2主要药品及试剂…………………………………………………………………59 1．3溶液和培养基……………………………………………………………………59 1．4主要仪器…………………………………………………………………………60 1．5实验方法…………………………………