神经解剖学方法浅析.pptVIP

;第一节 传 统 的 研 究 方 法;一、大体研究方法; 2、未固定尸体的移取 剥离软组织 锯切颅骨 切开硬膜 移取脑和脊髓 纱布包裹脑和脊髓 10％福尔马林固定;（二）脑血管的显示 1、经股动脉灌注有颜色的乳胶填充剂来显示;;2、经颈内动脉、椎动脉灌注红色填充剂显示 经颈内静脉、椎静脉灌注蓝色填充剂显示;（三）脑的解剖剥离标本 显示神经核群和相互交错神经纤维束标本 1、显示神经纤维束 2、显示主要神经核团;;锥体束;小脑上脚;3、脑纤维束剥离标本的制作;（四）脑室的显示方法;（五）脑厚片染色标本 选择性地浸染灰质和白质 原理：根据灰质和白质所含髓磷脂量不同;（六）脑和脊髓常用切面;（七）塑化标本 原理：通过固定、脱水、强制渗透和硬化四个步骤在真空中去除尸体液体和脂肪，然后用硅、环氧树脂等聚合物代替，处理后的标本不再腐化或有异味。 ;二、组织学研究方法 （一）利用光学和电子显微镜观察： 1、普通光学显微镜 2、电子显微镜 3、荧光显微镜 4、相差显微镜 5、倒置显微镜;（二）标本制作方法 1、固定 固定液：甲醛、酒精、醋酸、苦味酸、铬酸、 氯化汞和四氯化饿 2、切片 石蜡切片、冰冻切片、振动切片和超薄切片;3、神经解剖学传统染色方法 1）苏木精—伊红染色法（H-E染色法） 苏木精：将细胞核内的嗜碱物质染成蓝紫色 伊红：将细胞质和胶原纤维染成粉红色;H-E 染色;2）Golgi法 Camello Golgi (1843-1926) ，意大利人，1873年创建了用硝酸银镀染整个神经元的Golgi法 用硝酸银镀染整个神经元的方法 可显示完整神经元轮廓及突起的行向;Golgi法;3）Cajal （卡哈尔 ）法;神经细胞;4）Nissl法 1892年德国人创建，以发现Nissl小体和Nissl变性而闻名，变性神经元细胞质内有Nissl小体 用Nissl法逆行追踪细胞变性和Marchi法顺行追踪纤维或髓鞘变性——追踪神经元纤维联系主要手段;Nissl 法;Nissl 法;4）Weigert 法;Weigert 法;Weigert 法;;5）Marchi 法;Marchi 法;6）Glees 法、Nauta法、Fink-Heimer法;;Fink-Heimer 法;;7）髓鞘染色法;第二节 近代研究方法; 20世纪70年代出现的标记技术导致了神经解剖学研究方法的革命性变革。;一、辣根过氧化物酶法 ( HRP法 ) （ Horseradish Perosidase method ） 定义： HRP是从辣根中提取的一种过氧化物酶，是利 用HRP追踪神经通路的方法。 HRP用于神经通路及功能研究具划时代的意义 1971年：Kristenson和Olsson 首次报道HRP可被神经 末梢摄取，经逆行轴浆运输至神经元胞体后， 可用组织化学方法显示胞体经的定位。;利用轴浆运输原理标记神经纤维联系的方式 A：顺行标记 B：逆行标记 C：跨节标记;逆行标记;HRP 逆行示踪法; 跨神经节标记：结合HRP如麦芽凝集素-HRP ，（WGA-HRP） 霍乱毒素-HRP （CT-HRP） 结合HRP比单纯HRP更灵敏 ;HRP 跨节示踪法;二、荧光追踪法 1977年：由荷兰神经解剖学家Kuypers创立 原理：神经末梢摄取荧光化合物，通过轴突逆行运输到胞体内，在荧光显微镜下观察胞体定位。 逆行追踪 优点：1、方法简便，可靠和灵敏 2、利用不同颜色可同时追踪和显示多重神经 联系;;常用荧光追踪剂主要参数; 若选择脑内不同神经末梢分别注射两种或三种不同荧光追踪剂后，在同一胞体内能观察到两种或三种不同颜色的荧光，说明该神经之的轴突分支分别投射到事先选择注射该荧光剂的两个或三个脑区。;;FB、DY双标的结果;三、放射自显影神经追踪法 （Autoradiographic Nerve Tracing Method，ARNT） 定义：将放射自显影术应用于神经投射通路的研究。 1968年：Lasek等创立，顺行追踪 原理：神经元胞体可选择性摄取氨基酸并合成蛋白质， 顺行运输至神经末梢，用放射性示踪剂标记氨基 酸，在胞体内合成蛋白质后运输至神经末梢。;四、PHA—L顺行轴突追踪法 （Phase