常见化学发光技术3详解.pptVIP

现代免疫分析技术及展望; 为什么要讲这个专题 ？ 目的是什么？ 想解决什么问题？ ; 目前我省免疫分析技术在EQA检测方法上存在的主要问题 对所用仪器检测原理、所用检测方法不明确、不清晰。 方法编码填写错误，统计中出现分组不当等现象。;不适当的评价限及分组方法 对能力验证/室间质评结果所造成的影响 （以肿瘤标志物检测为例，适合内分泌检测）;;;;;二、不同类型检测试剂盒、仪器及实验检测方法 分组统计结果间的比较;;;;;;;;;;;; 何为免疫分析法？ 利用抗原抗体特异性结合反应检测标本中各种微量物质 （药物、激素、蛋白质、微生物等）的分析方法。 特点：高特异性、高敏感性 随着标记技术的发展，现代免疫学技术发生了质的飞 跃。; 1941年，Coons等创立荧光素标记抗体技术； 1959年，美国学者Yalow和Berson建立了胰岛素的放射免 疫分析技术； 1966年，美国和法国学者又同时报道建立了酶免疫测定 技术； 20世纪70年代，出现了免疫浊度技术； 另一项重大突破是：1975年Kohler和Milstein建立的杂 交瘤技术与单克隆抗体技术。 ; 现代免疫分析主要包括： 荧光免疫、酶联免疫、免疫浊度、化学发光及流式细胞 免疫等技术。 随着免疫标记技术、单克隆抗体技术、计算机技术的发 展，实验室的免疫自动化成为现实。 ; 免疫自动化使现代免疫检验具有： 准确、灵敏（可达10-17mol/L 以上） 快速（每小时可分析近200个测试） 高效（一份样品可同时检测数十个项目） 精密度（CV5%）、稳定等优点。 以下对现代免疫分析技术及仪器进行简单介绍。;一 、酶免疫分析（EIA） 利用酶催化底物，产生一系列生化反应，生成有色物的 生物放大作用，提高抗原-抗体免疫反应的分析技术。 按是否需将已结合的和游离的酶标记物进行分离，可将 酶免疫分析技术分为： 均相和异相EIA（大部分标记免疫测定均属异相EIA。) 均相：一般是指底物与催化剂同时存在于同一体系中，比如说：溶 液。 异相：一般是指底物与催化剂之间存在相界面，比如：吸附、固载 、键合于高分子树脂链、水-有机两相反应等。 ; EIA具有:特异、敏感的优点，最低检测限为mg/L 水平。 ; （一）酶联免疫吸附试验（ELISA） 1、待检标本（抗体或抗原）与酶标记抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体发生特异免疫反应； 2、反应终止时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合，与待检抗体或抗原量成一定比例； 3、加酶反应底物后，底物可在酶作用下出现颜色反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。 ; ELISA方法: 既特异又敏感。 应用此技术的自动化仪器设备包括： 罗氏公司: ES300、 Cobas Core（II） Bio-Rad 公司： CODA、EVOLIS ; （二）微粒子酶免疫分析技术（MEIA） 反应最终形成微粒上包被的抗体-被测物-碱性磷酸酶 标记的二抗夹心复合物，将其转移到玻璃纤维柱上，用缓冲 液洗涤，再加入底物进行测定。 优点：灵敏度高、定量线性范围宽。 见于美国Abbott公司IMX与AXSYM全自动快速免疫分析系 统。 ; （三） 酶促放大时间分辨荧光免疫分析（EATRF IA） 引入了时间分辨荧光免疫技术，有利于排除特异荧光的干扰，并经酶促信号放大，增强了测量的特异性。 见于美国 M D 公司（Molecular Devices Corporation）的SPECTRA max ?GEMINI XS。 ;二、 免疫浊度分析 利用可溶性抗原、抗体在特定的电解质溶液中特异结合， 形成一定大小的不溶的免疫复合物，使反应液出现浊度。 当反应液中保持抗