12第二章石蜡制片1-9节总汇.pptVIP

第二章 石蜡制片原理与方法;（1）材料的选择与分割 （2）材料的杀死、固定和保存 （3）冲洗和脱水 （4）透明 （5）浸蜡和包埋 （6）切片 （7）粘片 （8）染色 （9）封固;第一节 材料的选择与切割;3.注意按季节及植物生长发育的不同阶段而选取材料;最好先作徒手切片或剥离检查，决定适宜的材料立即固定处理。;大麦胚囊发育时期与花粉发育时期的相关性研究;大孢子发生;1. 横切面 切取时，刀的切向横越根、茎的横断面(与长轴方向垂直)的切面。 在横切面的切片中，可观察到材料由外向内的各种组织的横切面结构;各种组织细胞的特征及所占比例等都可以从切面上辨别出来;2. 纵切面 切取时，刀的切向与根、茎的长轴方向平行的切面。 (1)半径切面: 刀穿过中心点与其半径吻合的切面。可观察各种组织纵 向排列的情况。 (2)切线切面: 刀沿植物体的表面与其半径成直角所???的切面。;二、叶片的切取;叶片的切取;第二节 杀死、固定和保存;4.制片的核心问题: 固定 -如何在制片过程中保持生命的真实结构;(一) 固定作用的原理;1、固定的目的 (1) 迅速杀死原生质，并显示出其原来的细微结构； (2) 增加细胞结构及内含物的折光程度，使各部结构更为清 晰，适合在显微镜下观察； (3) 凝固组织中某部分，使材料适当的硬化，而便于切片； (4) 促进生物组织对于某些染色剂的媒染作用： 固定剂可直接影响以后的染色，有的固定剂会阻碍或不利于某种染色剂的着色。因此，选择固定剂时，就应事先加以考虑以后将采用何种染色剂染色。 ;2、根据上述的要求，理想的固定剂应具备下列条件 (1) 渗透力强：能迅速地渗透到生物组织或细胞的各个部分，立即杀死原生质，并固定其细微的结构，使其不发生变化； (2) 使组织或细胞不发生收缩或膨胀现象； (3) 能增加染色能力或媒染作用； (4) 具有良好的保存作用，材料经固定后能经久不坏； (5) 使组织适当的变硬，并具有一定的坚韧性，而便于切片。但是，又不能使材料过于坚硬，而不利于切片。 要达到上述各项要求的条件，用一种化学药品来处理，显然是难以达到。如酒精：渗透力强、但使原生质收缩；醋酸：使原生质发生膨胀。如两种药剂按适当的比例混合时，可相互抵消缺陷。因此，常用的固定剂都是由两种或以上的化学药品配合而成。;三、固定剂;(2) 95%酒精:普通的杀死和固定剂，可兼作保护剂。 特点: - 材料经固定后，不需进行冲洗或换液就可进行脱水，所以平时应用很多。 - 使原生质发生收缩，而细胞壁仍保持原状，一般用于无需保存细胞内含物的切片。 用法:固定时间15-30min，如固定时间过长，材料变脆而易折断，难以切片。 材料经95%酒精杀死固定后，一般常换入70%酒精作保存液。;2.铬酸(H2CrO4): 红棕色结晶体,易潮解。 特点：研究细胞学方面必不可少的药剂。是很好的固定剂和保存 剂，可使蛋白质、核蛋白、核酸等产生良好的沉淀，而且 所产生的沉淀不再溶解。 缺点： - 对脂肪及拟脂类等没有作用。组织固定时，不能直接暴 露在阳光下，否则会引起已固定的蛋白质分解。 - 容易使组织收缩，渗透力较弱，且能使组织发生过度硬 化，因此常与其他药剂混合食用。 用法：饱和度可达62%以上，通常配成2-10%的水溶液基液，应用 时随时稀释至所需的浓度，一般用0.5-1%的水溶液作为固 定用。;3.苦味酸(C6H2(NO2)3OH):淡黄色具光泽的结晶，一种强烈的爆炸药，干粉与高温或撞击易爆炸，因此常以过饱和的水溶液进行保存。水中的溶解度为0.9-1.4%。 特点：渗透力较强，能使组织发生较强的收缩。通常用饱和水溶 液作为固定剂。可使蛋白质、核蛋白及核酸发生沉淀作 用，对于胚囊自由核时期的固定作用最好 用法：很少单独使用。固定后，材料必须用50%或70%酒精洗涤， 不能用水冲洗，否则沉淀将会破坏。;4.冰醋酸(CH3COOH) 特点： (1)渗透力很强，而且十分迅速，能溶解脂肪，产生酸性的固定 象。 (2)是一种良好的保存剂，除防腐之外，还可保存其中的蛋白质 等，又是染色体很好的保存剂。 (3)使组织的细胞发生膨胀作用，可防止其他药剂如酒精、甲 醛、铬酸等容易引起收缩的缺点，可以有相互平衡的作用。 用法：通常用1-5%的溶液作为固定剂，不单独使用，可与水或酒 精任意混合成各种需要的固定液。 ;1.甲醛(HCOH):又叫福尔马林，气体，常见的是溶于水中的无色 溶液，饱和度为40%左右。 特点:可单独作为杀死和固定之用。是很好的硬化剂，但渗透 慢， 单独使用时产生碱性固定象，而不能沉淀蛋白质。 用法： - 容易使材料发生收缩和固定过渡的现象,最好与其他药 品配合使用。 - 和酒精混合使用，可以阻止因酒精造成材料过渡坚硬的 缺点。;2.重铬