实验二.ppt.pptVIP

实验二 动物细胞的原代培养;实验目的;实验原理;实验用品;实验方法; 组织细胞培养室一般由准备间、缓冲间以及无菌操作 室组成。;无菌室;风淋室; 无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持 在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达 到100级。;二 组织块法; 操作者进入无菌室前先用肥皂洗净双手 ，然后用1‰ 新洁尔灭浸泡消毒5分钟;将小白鼠断颈处死，然后用75% 酒精浸泡消毒，迅速进入无菌室。 ; 将小白鼠置超净工作台上的托盘内，使其腹部朝上， 用75％酒精棉球擦拭消毒腹部的被毛。;在腰部的后缘，用镊子提起皮肤，用剪刀剪开 皮肤，将剪开的皮肤分别拉向两侧。;再换用一把解剖剪和解剖镊，剪开腹部的肌肉，暴露出 腹腔，取出肾脏，置无菌培养皿中。; 用眼科剪和镊，将肾外膜剪破，并将其剥向肾门，去肾外膜及脂肪，用PBS洗涤一次，将洗涤过的肾脏转入另一培养皿中。 ;换一把眼科剪和镊，沿肾脏的纵轴剪开，用PBS液将肾脏连续漂洗 3－5次，每漂洗一次更换新的PBS液，最后加入少量1640培养液， 将组织块切成大小约1－2立方毫米的小块（米粒大小）。 ;用弯头镊子将组织小块移入细胞 培养瓶中（在细胞培养瓶上预先 注明细胞类型、组别、操作者姓 名、日期等），将它们黏附在培 养瓶的瓶壁上。 ;整齐地排列成行，每块组织间距约 0.