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Western blot 实验技术及常见问题分析;关于印迹法;关于免疫印迹检测;Western Blot基本原理;Western Blot应用;低温超速离心机（Eppendorf公司） 分光光度计（Bio-Rad公司） 电泳仪（Bio-Rad 公司） 垂直式电泳槽（Bio-Rad 公司） 硝酸纤维素膜电转系统（Bio-Rad 公司）;;;;;Western Blot一般流程;通过水溶液或有机溶剂制备总蛋白 水溶液提取法 稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大，是提取蛋白质最常用的溶剂。 细胞裂解液： 50mmol/L Tris-HCl, 150mmol/L NaCl, 5mmol/L EDTA, 1%NP40，0.05% PMSF，2μg/mL Aprotinin, 0.5μg/mL Leupeptin，pH8.0 有机溶剂提取法 对于分子中非极性侧链较多的蛋白质可用有机溶剂提取，包括乙醇、 丙酮和丁醇等。 通过层析或电洗脱法制备目的蛋白 ;裂解方法取决于细胞的型别和待测抗原的性质： 1. 表达靶蛋白的细菌一般直接用SDS凝胶加样缓冲液裂解。 2. 酵母先用玻璃珠振荡法或酶法裂解细胞，然后制备提取液。 3. 哺乳动物组织通常可以机械分散并直接溶于SDS凝胶加样缓冲液。 4. 哺乳动物细胞可用去污剂温和裂解。如果靶抗原耐受相应抽提过程，也可