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- 2016-07-21 发布于天津
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实验目的学习从动物组织中提取DNA及其含量、纯度测定的原.ppt
实验目的
学习从动物组织中提取DNA及其含量、纯度测定的原理和方法
掌握离心机的使用方法
;在0.15M的氯化钠溶液中脱氧核糖核蛋白的溶解度最低。用0.15M氯化钠溶液洗涤可洗去其它物质。
沉淀用SDS处理,SDS使蛋白质与DNA解离,再用氯仿-异丙醇抽提,将蛋白质沉淀除去,而DNA则溶解。
DNA溶液用乙醇沉淀析出。;实验操作;加约2倍
体积
95% 乙醇;注意事项;加入15% SDS时要慢,边搅边滴加(两人配合)。
SDS的温度不能太低,易凝固。吸过SDS的吸管要及时清洗。
加入CHCl3/IAA液离心后,分为三层,由上到下为:无机相-蛋白相-有机相。DNA溶解在无机相中,吸取无机相时动作要轻,不要吸到蛋白相。
CHCl3/IAA会溶解有机玻璃,用完后不能竖直放置在试管架上,必须冲洗干净。;离心机的使用;二苯胺显色法测定DNA含量;取8支试管,按实验指导的表格加入试剂。
加毕置沸水浴10分钟,取出冷却;以0号管??空白管)调零点,于595nm波长比色。
以光密度为纵坐标,DNA含量(μg/ml)为横坐标,绘制标准曲线.
将实验中所得到的兔肝DNA溶液作为待测样品,取两只试管,分别标“U”和“B”,按表加入试剂。
混匀,置沸水中10min, 取出冷却。
在595nm处,以B管调零,测得待测液的光密度值,从标准曲线上查出相当于该光密度值DNA的含量。;核酸在220-320nm处呈
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