专题1 基因工程复习知识点和练习.docVIP

翔宇教育集团宝应中学复习教学案 选修1—专题1 基因工程 主备人：杨学志 基因工程 第 PAGE 14页 选修3现代生物科技专题 专题1基因工程知识点背诵 1．1 DNA重组技术的基本工具 一、概念：基因工程又叫做DNA重组技术，就是按照人类的要求，把一种生物的个别基因复制出来，加以修饰改造，然后导入另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 二、基因操作的工具：基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工，即对DNA分子进行剪切和拼接，其主要工具有： 1．分子手术刀：限制性内切酶，简称限制酶。这种酶主要存在于原核生物中，由于每种限制酶能识别特定的核苷酸序列，因此，限制酶能在特定的切点上切割DNA分子。 特点：A、专一性：每一种限制酶只能识别双链DNA分子一种特定的核苷酸序列。 B、切点：各种酶切点不同，即具有特定的酶切位点。 作用：在特定的切点上切割DNA分子形成两个完全相同的黏性末端。 种类：有4000多种限制酶，切割成的DNA末端可分为两大类：黏性末端和平末端(中轴线切口为AT，CG) 2．分子缝合针：其实质是一种DNA连接酶。 作用：是把两个黏性末端之间的缝隙“缝合”起来。（实质是“缝合”磷酸二酯键 ） 酶的分类： A、Ｅ．coli DNA连接酶(从大肠杆菌中分离得到，只能对互补链的黏性末端起作用) B、T4 DNA连接酶 （对两种末端都起作用） DNA连接酶与DNA聚合酶的异同： （1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上，形成磷酸二酯键，在DNA复制中起作用；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键，在基因工程中起作用。 （2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，因此DNA连接酶不需要模板。 二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。 3．目的基因的运输工具：运载体(或分子运输车)，借助运载体将外源目的基因送入受体细胞。 常用的运载体是质粒，还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。作为运载体要符合以???条件： a.对受体细胞的生存没有决定性影响；b.能停留在受体细胞内复制，并稳定保存； c.具有多个限制酶切点，便于目的基因的连接；d.具有某些标记基因，便于筛选、检测。 三、重组DNA模拟操作注意： 剪刀是模拟EcoRI， 用不干胶时，意识到它是模拟DNA连接酶，只能黏连磷酸二酯键处，而不能去黏连碱基对处。 1．2 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取： 1．目的基因的概念：符合人们需要的编码蛋白质的结构基因， 2．目的基因的获取方法： （1）从基因文库中获取目的基因 A、基因文库概念：将含有某种生物不同基因的多个DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称基因文库。 概念理解（实质是：一细菌群体中含有这种生物的不同基因） B、基因文库分类: 基因组文库：含有一种生物全部基因（理解：相当国家图书馆） cDNA文库(部分基因文库)：只含有一种生物部分基因（理解：某市图书馆 ） （2）利用PCR技术扩增目的基因 PCR技术是聚合酶链式反应的缩写，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术。实施PCR技术的条件：①一段已知的目的基因的核苷酸序列②引物③热稳定DNA聚合酶④原料（脱氧核淦酸核苷酸）⑤能量（ATP）。 实施PCR技术的过程可以在PCR扩增仪中自动完成。 从供体细胞的DNA中分离，如鸟枪法。 （3）其它方法方法　　　　　　　　 反转录法： 人工合成基因 　　　　　　　 据已知的氨基酸序列合成： 反转录 合成 蛋白质 单链DNA mRNA 基因 DNA序列 mRNA 氨基酸 序列 推测 推测 合成 二、基因表达载体的构建（目的基因与运载体结合），是基因工程的核心步骤 基因表达载体的组成：表达载体=启动子+目的基因+终止子+标记基因 表达载体的功能: 使目的基因在受体细胞中存在，并且遗传给下一代，使目的基因表达和发挥作用 启动子：是特殊的ＤＮＡ片段位于基因的首端，它是ＲＮＡ聚合酶的识别和结合部位，用于启动转录产生mＲＮＡ。 终止子（相当红色信号灯）：位于基因的末端用于终止转录过程。 标记基因：鉴别受体细胞是否已含有目的基因。 基因表达载体的构建的步骤： 用同一种限制酶去切割质粒和目的基因，露出 ，加入DNA连接酶，形成重组DNA分子。 三、将含目的基因的表达载体（重组DNA分子）导入受体细胞 1、将含目的基因的导入植物体细胞