专题一 基因工程复习课.pptVIP

;一、基因工程的工具及其操作程序 1．基因工程的基本工具;;1. 限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 2. DNA连接酶起作用时不需要模板。;1. 获取目的基因和切割载体时使用同一种限制酶，目的是产生相同的黏性末端。 2. 获取一个目的基因需限制酶切割两次，共产生4个黏性末端或平末端。 3. 限制酶切割位点的选择必须保证标记基因的完整性，以便于检测和筛选。;2.基因工程的基本操作程序 (1)目的基因的获取 ①从基因文库中获取目的基因 优点：有了基因文库，就可以随时从中提取所需要的目的基因，引入受体细胞使之表达。;②人工合成目的基因;③利用PCR技术扩增目的基因 a．PCR：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。PCR扩增是获取目的基因的一种非常有用的方法，也是进行分子鉴定和检测的一种很灵敏的方法。 b．目的：通过指数式扩增获取大量的目的基因。 (2)基因表达载体的构建 ①目的：;(2)基因表达载体的构建方法; (1)一般来说，天然载体往往不能满足人类的所有要求，因此人们根据不同的目的和需要，需要对某些天然的载体进行人工改造。 (2)插入的目的基因的表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入部位之前需有启动子，之后需有终止子。;1．(2009年潍坊模拟)质粒作为“分子运输车”的条件是 (　　) ①能够自我复制　②双链环状DNA分子　③有多个限制酶切点　④有标记基因　⑤真核细胞中没有 A．①②③④⑤　　 B．①②③④ C．①③④ D．②③⑤ 【答案】　C;2．(2009年南通调研)下列关于基因表达载体构建的相关叙述，不正确的是 (　　) A．需要限制酶和DNA连接酶 B．必须在细胞内进行 C．抗生素抗性基因可作为标记基因 D．启动子位于目的基因的首端 【答案】　B;(3)将目的基因导入受体细胞 ①目的：目的基因进入受体细胞内并在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 ②受体细胞种类不同，导入方法不同。;;③受体生物不同，所用的受体细胞种类也不相同。 a．植物：可以是卵细胞(受精卵)、体细胞(可经组织培养成为完整植株)。 b．动物：受精卵(因为体细胞的全能性受到严格限制)。 ④转化实质：目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。;基因工程中受体细胞的选择 基因工程的目的不同，可选用的受体细胞不同。 (1)培育转基因动物，受体细胞一般选用受精卵。 (2)培育转基因植物，受体细胞可选用受精卵或体细胞，若选用体细胞，再通过植物组织培养，即可获得转基因植株。 (3)若生产基因工程药品，受体细胞一般选用细菌，利用细菌繁殖速度快的特点，可在短期内获得大量产品。;(4)目的基因的检测与鉴定;;【例2】　(2009·福建高考·T32)转基因抗病香蕉的培育过程如图所示。质粒上有Pst Ⅰ、Sma Ⅰ、EcoR Ⅰ、Apa Ⅰ等四种限制酶切割位点。请回答：;1. 使用限制酶切割目的基因和质粒时，既要保证形成相同黏性末端，又要考虑保证目的基因和质粒中的标记基因的完整性。 2. 标记基因是鉴别受体细胞中是否含目的基因的依据。利用质粒作载体时往往利用其上的某抗性基因作标记基因，又可利用其抗性在适当的选择培养基上选择培养。 ;二、基因工程的应用成果及蛋白质工程 1．基因工程的应用成果 (1)乳腺生物反应器与微生物生产的比较;;(2)基因治疗; 基因治疗是治疗人类遗传病的根本方法，但由于尚未全面了解基因调控机制和疾病的分子??理，基因治疗只处于初期的临床试验阶段。;2．蛋白质工程 (1)概念：是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。 (2)过程：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列。;(3)蛋白质工程与基因工程比较; 蛋白质工程的实施步骤(蛋白质工程的实质即“中心法则”的逆推： ;4．(2010年南京调研)下列关于蛋白质工程的说法，正确的是 (　　) A．蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作 B．蛋白质工程能生产出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子 C．对蛋白质的改造是通过直接改造相应的mRNA来实现的 D．蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的;(2009年高考浙江理综卷)下列关于基因工程的叙述，错误的是 (　　) A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性