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生物大分子分离与提取 理论授课32学时 2010级生物科学1班、2班 刘 林 第一讲 分离前的准备工作 2学时 重点： 了解生物大分子的范畴 分离前需要哪些准备工作 超速离心 难点： 超速离心 具体内容： 生物大分子类型： 蛋白质 脂类 糖类 多酚类 核酸 糖蛋白 脂蛋白糖-酚复合 生物大分子来源： 微生物发酵液 酶反应产物 动植物细胞培养体系 动物体 植物体 微生物细胞 分离用的技术： 离心技术 萃取技术 固相析出技术 吸附技术 离子交换技术 色谱技术 膜技术 液膜技术 分离前的准备工作： 加热 凝聚 絮凝 分离前去杂质的方法： 等电沉淀法 变性沉淀法 吸附 酶法---糖 化学试剂----金属离子 细胞破碎的方法： 高压匀浆法 高速珠磨法 超声波法 化学法 酶解法 冻结-融化法 渗透压冲击法 干燥法 固-液分离的方法： 过滤：常规过滤conventional filtration；错流过滤crossflow filtration 沉降： 离心：离用固-液两相密度差，在离心机无孔转鼓或管子中进行悬浮液分离的过程 超速离心： 根据沉降系数、质量和形状不同，用强大离心力将混合物中各组分分离、浓缩和提纯的方法。 原理：颗粒的沉降速度决定于离心力、颗粒直径、颗粒密度、介质密度。当粒子直径和密度不同时，移动速度不同，同样时间内移动的时间不同。 差速离心differential centrifugation： 速率区带离心rate zonal centrifugation 等密度离心Equilibrium gradient centrifugation 操作要点（视频） 总结： 超速离心技术 细胞破碎技术 固-液分离技术 第二讲 萃取技术 2学时 复习： 超速离心技术的操作要点 重点： 什么是萃取 萃取的原理 萃取类型 难点： 超临界流体 具体内容： 关于萃取的基本知识： 利用溶质在互不相溶的两相之间分配系数的不同而使溶质得到纯化或浓缩的技术。 据原理不同分为：物理萃取、化学萃取、双水萃取和超临界液体萃取等。 据参与溶质分配的两相不同分为：液-固萃取和液-液萃取（溶剂萃取） 与其它技术相比，萃取的优点： 选择性； 能与其它纯化步骤配合 减少降解 从潜伏的降解过程中分离产物 适用于不同规模 传质快，周期短，便于连续操作，易于实现计算机控制。 溶剂萃取技术： 定义：利用化合物在互不相溶的两种溶液中的溶解度不同使其从一种液体进入另一种液体的技术。 原理：在液体混合物中加入一种与其基本不溶的液体溶剂，形成第二相，利用原料液中各组分在两个液相中的溶解度不同而使原料液混合物得以分开。构成第二相的溶剂为萃取剂，以S表示，原料液中易溶于S的组分称为溶质，以A表示；难溶于S的组分称为原溶剂B。 Liquid-liquid extraction is a method to separate compounds based on their relative solubilities?in two different?immiscible?liquids, usually water and an?organic solvent. It is an?extraction?of a substance from one liquid?phase into another liquid phase. Liquid–liquid extraction is a basic technique in chemical laboratories, where it is performed using a?separatory funnel. This type of process is commonly performed after a chemical reaction as part of the?work-up. 溶剂萃取的基本过程： 混合，扩散，分层产生萃取相E和萃余相R 双水相萃取： 相一：PEG/小分子盐（磷酸钾、磷酸铵、硫酸钠） 相二：PEG/大分子有机物（葡聚糖、聚乙烯醇） 双水相萃取的应用： 分离和提纯蛋白质：体系为PEG/NH4SO4 ，从酵液中分离α-淀粉酶，从牛奶中分离蛋白 分离抗生素：丙酰螺旋霉素，体系为PEG/Na2HPO4 , 天然产物的分离：中草药 超临界流萃取： 定义：处于临界温度和临界压力以上的非凝缩性的高密度流体。气液两相无法分别。 原理：溶质在超临界流体中的溶解度随超临界流体密度的增大而增大。先用高压状态溶解，再改变压力或温度使其析出。 最常用的超临界流体：CO2 超临界流萃取的工艺：等温法；等压法；吸附法 超临界CO2流体萃取设