干扰βcatenin信号通路对人胃癌细胞株miRNA表达谱影响.pdfVIP

摘要 摘 要 目的： 本研究拟通过构建慢病毒载体介导干扰人胃癌 AGS、MGC-803 细胞系中 β-catenin 信号通路的活性,利用 miRNA 芯片技术寻找干扰后差异表达的 miRNA 表达谱，为进一步了解β-catenin 信号通路及相关 miRNA 调控胃癌的机制打下基 础。 方法： 构建干扰β-catenin 基因（ctnnb 1）的慢病毒，分别感染人胃癌 AGS 和 MGC-803 细胞系。实时荧光定量 PCR 和 Western Blot 检测干扰效率。 将 AGS 细胞分两组：1）实验组：AGS 干扰组，2）对照组：AGS 细胞组； 将 MGC-803 细胞分为两组：1）实验组：MGC-803 干扰组，2）对照组：MGC-803 细胞组。利用 miRNA 芯片筛选两种细胞干扰β-catenin 后差异表达的 miRNA， 并通过 qPCR 技术验证部分芯片结果。 结果： 1、成 功 构 建 干 扰 β-catenin 基 因 的 慢 病 毒 LV3-CTNNB1-homo-433 与 LV3-CTNNB1-homo-769。LV3-CTNNB1-homo-433 对 AGS 细胞及 MGC-803 细 胞均具有干扰作用，LV3-CTNNB1-homo-769 对 AGS 细胞无干扰作用，对 MGC-803 细胞有干扰作用。 2、感染 LV3-CTNNB1-homo-433 后，AGS 细胞、MGC-803 细胞中 miRNA 表达谱产生明显变化。其中，AGS 干扰组较 AGS 细胞组有 40 个 miRNA 上调， 32 个 miRNA 下调；MGC-803 干扰组较 MGC-803 细胞组有 56 个 miRNA 上调， 86 个 miRNA 下调。 3、qPCR 验证 hsa-miR-135b-5p、hsa-miR-210 表达，结果与芯片结果基本一 致。 结论： 干扰β-catenin 信号通路对人胃癌 AGS、MGC-803 细胞的 miRNA 表达谱有 影响。 β-catenin 信号通路可能通过调控 miR-135b-5p、miR-210 对胃癌产生影响。 II 万方数据 摘要 关键词：慢病毒、β-catenin 信号通路、miRNA 芯片、胃癌 III 万方数据 Abstract ABSTRACT Objective： This study used Lentivirus to disturb the β-catenin signaling pathway in human AGS and MGC-803 gastric cancer cells, then detected the differential expression of microRNAs (miRNAs) before and after interference via miRNA microarray.