常用分离材料及用途(徐少华).pptVIP

常见分离材料及用途;一、正反相硅胶;1.硅胶的组成及分类;2.硅胶的分类;2.1 颗粒大小 作为分离材料的硅胶，其颗粒的形状大小、孔的结构、孔径及其分布、总孔容、比表面及机械强度等，均是重要的参数。目前，通用的分析型硅胶基质的直径为5-10μm，且其化学键合相硅胶已有商品出售，而高效制备型所用的硅胶，其直径多在20-40μm之间。 ;2.2正反相硅胶柱 正相柱大多以硅胶为柱填料或是在硅胶表面键合-CN,-NH3 等官能团的键合相硅胶柱。反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能（ODS）称为C18 柱。其它常用的反相柱还有C8,C4,C2 和苯基柱等。 一般的C18 柱pH 值范围都在2-8，流动相的pH 值小于2 时，会导致键合相的水解；当pH 值大于7 时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。如果流动相pH较高或经常使用缓冲液时，建议选择pH 范围大的柱子。;2.3硅胶的制备方法 根据硅胶制备的不同技术原理，可将它们分为3类：? (1)堆积硅珠法；? (2)溶胶→凝胶法(S0L-GEL)；? (3)喷雾干燥法。;二.硅胶的性质及使用原理;硅胶是一种酸性吸附剂，适用于酸性或中性成分的分离。其表面上的硅醇基具弱酸性，对碱性化合物吸附力强。硅胶作为吸附剂有较大的吸附容量，分离范围广，能用于极性和非极性化合物的分离，如有机酸，挥发油、黄酮、萜类、氨基酸，皂苷等。;3.硅胶的作用原理 硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。 ?　　硅胶柱层析流动相极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸  ;硅胶吸附剂是粉末状多孔固体，其起到吸附作用的基团是硅醇基上的羟基（吸附中心），这些羟基所处的形态不同，其吸附能力也不同。硅羟基的吸附性能排列为：活泼型（a）自由型（b）束缚型（c）游离型（d），各型结构见下图。 ;正反相硅胶柱的区别;正相色谱柱与反相色谱柱的区别本质上是填料(固定相)的不同，正相色谱柱填料极性强，通常为硅胶以及其他具有极性官能团胺基团和氰基团的键合相填料，洗脱顺序由弱到强;反相色谱柱填料极性弱，通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对弱官能团的键合相，洗脱顺序由强到弱。 ;三.硅胶柱的使用过程;4.装柱。将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。 ;5.压实。沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约被压缩至9/10体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。 6.柱子沉降时间：自然沉降一般一夜，如果时间紧张也可以沉降1-2小时即可 。;7.上样：干法湿法都可以。上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面；或者在样品的上部加一些空白硅胶。然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。 个人经验：加空白硅胶效果不好。 一：样品容易扩散到空白硅胶上面，导致分离效率降低； 二：加洗脱剂的时候容易将空白硅胶冲散。 ;8.过柱和收集:柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好，常用梯度洗脱。收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。;二、凝胶;交联葡聚糖凝胶 G交联葡聚糖的Sephadex ，G-25的羧丙基衍生物， 能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。 琼脂糖凝胶 琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。;聚丙烯酰胺凝胶 是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。 聚苯乙烯凝胶 具有大网孔结构， 可用于分离分子量1600到40,000,000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。;凝胶层析的分子筛原理;吸附原理 吸附：范德华力或产生氢键 反相分配原理 分配：极性与非极性溶剂组成的混合剂（反相溶剂）中起到反相分配的效??