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时间分辨荧光蛋白 Time-Resolved Protein Fluorescence ;荧光蛋白的时间分辨测量 time-resolved measurements of protein fluorescence;1、蛋白质的荧光的单光子激发需要 波长在280至305纳米的范围内。 2、蛋白质荧光激发脉冲激光二极管尚未公布 。脉冲LED用于 蛋白质的荧光激发刚刚宣布， 但脉冲宽度超过1纳秒。 3、最近的研究 所用的脉冲将Ti的三倍频输出：蓝宝石激光或同步加速器辐射。 ;缺乏的认识色氨酸本身的强度衰减 多个色氨酸残基存在于一个单一的蛋白质，并显示在复杂的衰变动力学当中 色氨酸本身在在中性pH溶液中显示一个多指数或者非指数衰减;1.INTENSITY DECAYS OF TRYPTOPHAN:THE ROTAMER MODEL;用时间分辨在解释蛋白质的衰变强度时的困难在于对色氨酸本身强度衰减缺乏了解 在中性水溶液中的色氨酸的强度衰减是一种已知的双指数衰减，时间近3.1和0.5 ns 色氨酸双指数衰变占主导地位是由于旋转异构体的存在;芳香族氨基酸和相关化合物在20°C，pH值7时的强度衰减;在溶液中的色氨酸侧链采用不同的构象， 一个色氨酸溶液可以被视为一个的旋转异构体的混合物，即所谓的旋转异构体。 在中性水溶液中，色氨酸两性离子形式时氨基被质子化（NH3 +）和羧基电离（CO2–）。 在溶液中的色氨酸能自淬灭，涉及吲哚环和带正电荷的铵基团。色氨酸也可以由氨基酸侧链淬火;铵基淬火依赖于一定PH下色氨酸荧光量子产率 随着pH从8提高到10的氨基发生解离，量子产量和平均寿命增加约三倍 ;如何通过氨基淬火解释色氨酸在pH值为7的双指数衰减？;酪氨酸和色氨酸及其中性的结构类似物;2.TIME-RESOLVED INTENSITY DECAYS OF TRYPTOPHAN AND TYROSINE色氨酸和酪氨酸的时间分辨强度衰变 ;2.1色氨酸的衰变相关的发射光谱;的短期和长期ns色氨酸的衰减成分的光谱分辨率;2.2酪氨酸及其中性衍生物的强度衰变;酪氨酸及其中性类似物 N-乙酰基-L-酪氨酰胺的频域的强度衰减;酪氨酸本身显示一个单指数衰变而NATyrA显示一个双指数衰变（可能是基态旋转异构体的存在） 酪氨酸在水中的强度衰减通常是一个单一的指数 ;3.INTENSITY AND ANISOTROPY DECAYS OF PROTEINS蛋白的强度和各向异性??变;3.1单指数强度和核糖核酸酶T1的各向异性衰减;核糖核酸酶T1由104个氨基酸组成的单链多肽;;时间分辨荧光强度和各向异性在缓冲水溶液的pH值5.5的核糖核酸酶T1衰减;3.2膜联蛋白V：钙离子敏感的单色氨酸蛋白质;在不存在钙时膜联蛋白V呈高度非指数的强度衰减;;3.3有两个色氨酸蛋白质的各向异性衰减;时间分辨的单色氨酸的各向异性衰变的磷转运蛋白突变体。296 nm激发;4. ANISOTROPY DECAYS OF PROTEINS蛋白的各向异性衰变;相移和解调的频率依赖性在学叶菌的β-葡萄糖苷酶的荧光发射因素 中性pH在5，45和85℃。;在所指示的温度S.叶菌β-色氨糖苷酶寿命分布;;5.TIME-DEPENDENT SPECTRALRELAXATION OF TRYPTOPHAN色氨酸的光谱松弛时间;吲哚甘油20°C的强度衰减;;衰变相关光谱（顶部）和时间分辨发射谱（下）。DAS和TRES是从吲哚的甘油在20℃下相同时间分辨衰变计算出来;衰变相关的光谱和时间分辨发射 从谱图，在30℃，289-nm激发髓鞘碱性蛋白;6.PERSPECTIVES ON PROTEIN FLUORESCENCE透视荧光蛋白; 多光子激发显微镜 Multiphoton Excitation and Microscopy ;多光子激发特点;多光子与单光子比较;;多光子显微镜原理;;;多光子显微镜示意图;