甲胎蛋白(AFP)定(化学发光法).docVIP

西安长安医院 检 验 科甲胎蛋白(AFP )测定(化学发光法) 文件编号：CA-JY-CZ-MY 第 二 版 执行日期：2010-1-4 共5页 第1页 １　?原理 AFP是胚胎时期的重要血清成分，由内黄囊和肝细胞合成，胎儿出生后其浓度急剧下降，几个月至一年可降至正常水平，正常值小于20ng/ml。本检验科使用日本东曹AIA-1800型全自动免疫发光分析仪进行 测定，采用微粒子捕捉酶免疫分析技术(MEIA)。 AFP测定利用双抗体夹心法原理：已包被了抗体的塑料微珠试剂中，加入待测标本后，经温育，再加入碱性磷酸酶标记的抗体、形成“抗体－抗原－酶标记抗体复合物”。然后将其转移到玻璃纤维柱上，用缓冲液洗涤，没有结合的抗原、酶标抗体被洗掉，结合抗原抗体的塑料微珠则被保留在纤维柱滤膜的上方。这时再加入底物：4-甲基伞型酣磷酸盐(4-Mup)。酶标抗体上的碱性磷酸酶将4-Mup分解,脱磷酸后形成甲基伞型酣(4-Mu)，它在365nm激发光的照射下，发出448nm的荧光，经过荧光读数仪的记录、放大，计算出所测物质的含量。 2 标本采集与处理 2.1 原始样本类型：血清、血浆或全血（应用抗凝剂为肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA）、尿液(晨尿、随即尿、24小时尿等)或其他体液(羊水等)。 2.2 样本量：根据不同项目样本量不等（83μl-238μl）。 2.3患者准备：严禁使用接受过鼠单克隆抗体诊断或治疗的病人样本，引起体内含有人抗鼠抗体（HAMA），当这些样品在使用含鼠单克隆抗体分析试剂进行测试时，引起结果升高或降低。 2.4 样本采集方法：一般采用静脉采血。 样本采集要求： 避免过度溶血，必须在无菌体条件下采集； 确保离心速度（10000转/分钟）和时间（10分钟），避免颗粒物质的干扰。 避免样品的反复冻融，溶解后的样品需低速震荡或轻轻颠倒混匀已获得稳定的结果。若样品中有颗粒物质，红血球或浑浊物质必须离心使其澄清后再进行测试。 2.5样品的稳定期和保存：上机3小时内完成检测；2℃-8℃标本可保存1-14天；若需长期保存（1年内），必须将血清分离出来，冷冻保存（-10℃或更冷）。 3 ?? HYPERLINK /download.html \t _blank 试剂3.1 所有试剂均购自日本东曹公司 TOSOHⅡ相关校准品 TOSOHⅡ相关校准品1 TOSOHⅡ相关校准品2 TOSOHⅡ样本稀释液 TOSOHⅡ基质：4-甲基伞形酮酰磷酸 TOSOHⅡ基质溶解液 TOSOHⅡ清洗液 TOSOHⅡ缓冲液 3.2 试剂准备与检查： 从冰箱中取出1号液（底物液）放入仪器 从冰箱中取出相关测试试剂放入仪器 检查所有试剂和缓冲液是否在有效期内，超过有效期的试剂不可使用 检查所有试剂和缓冲液是否足够 检查所有消耗品（纤维杯或反应杯）是否足够，废液或废物是否清空 3.3 试剂保存条件： 试剂盒、标准品、质控品在2℃-8℃保存。 3.4 试剂性能可接受性： 按测定项目资料手册中质量控制章节所规定内容进行质量控制，结果必须在实验室规定的可接受范围内。 4 ??操作步骤??? 1 开机前检查 a 察看电源是否正常安全通电 b 推主机下部的前门，打开后检查洗净水与分注液的用量是否满足当日用量废试样杯与废吸嘴是否丢弃 2 开机 a更换75%酒精，放置基质液 b 打开电脑主机及AIA-1800电源, 点击主业面进入root c 试样吸嘴的设置及酶标识试剂，检体稀释液的设置，按主机操作版面Reagent/Tip键，LED指示灯变为绿色，打开试剂吸嘴护罩，将酶标识试剂，检体稀释液设置在试剂托架上，将条形码标识面朝前 d 试剂杯的设置，按主机操作版面的Cup Sorter键，LED指示灯变为绿色，拉开分类器抽屉将试剂托盘设置在分类器托盘上，将分类器抽屉推到底 3 开机日检 4 日检通过后，进行标本检测，在树形菜单上进入界面设置标本检测项目，Assay键点击开始测定 5 测定完毕后，按主机操作版面的Cup Sorter及Reagent/Tip键，LED指示灯变为绿色，打开试剂吸嘴护罩及分类器抽屉，收集试剂放入冰箱，更换基质液，放置75%酒精 6 点击关机，待窗口消失，关闭AIA-1800电源，在关闭电脑及主电源 5 质量控制： 每批试剂都要使用东曹公司标准品作质量控制，请参见AIA-1800仪器操作手册。 ?6 ?结果计算（定量分析）： 利用点对点数据产生方法来产