神经病理性疼痛大鼠髓背角神经型一氧化氮合酶表达的多样性和相应亚型对PC12细胞NF-kappaB活性的影响.docVIP

神经病理性疼痛大鼠脊髓背角神经型一氧化氮合酶表达的多样性和相应亚型对PC12细胞NF-kappa B活性的影响 （华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室， 武汉 430030） 金小高 罗爱林 王金韬 张广雄 王贤裕 李亚文 [摘要] 目的：研究神经病理性疼痛大鼠脊髓背角神经型一氧化氮合酶亚型的表达变化，检测相应亚型对NF-kappa B转录活性，探讨神经型一氧化氮合酶各亚型的表达变化在致痛机制中的意义。方法：雌性SD大鼠20只，体重150～200g，随机分为2组（n=10），对照组和SNI组。 SNI组于左肢制备坐骨神经保留性神经损伤模型（SNI），对照组实施假手术。手术前后测定大鼠对机械刺激产生缩腿反应的次数。术后11d痛觉测定后，每组取3只大鼠用于灌注，应用免疫组织化学方法检测脊髓nNOS的表达。7只大鼠断头处死后分离L4-6脊髓，提取其中3只大鼠脊髓的蛋白质，应用抗nNOS羧基端抗体和Western Blot方法检测nNOS的表达，提取其中4只大鼠脊髓的RNA，1只大鼠脊髓RNA进行RACE-PCR和Southern Blot实验检测nNOS不同的mRNA；余下3只大鼠脊髓的RNA用于检测nNOS的mRNA变化。将携带nNOSα或nNOSβ基因的pcDNA3.0表达质粒通过脂质体转染PC12细胞后，提取经筛选PC12细胞的核蛋白，采用EMSA凝胶电泳阻滞实验检测细胞核NF-kappa B转录活性。结果：SNI组术后3d机械刺激术侧后爪引起缩腿反应的次数高于对照组（P0.05）。nNOS主要表达于脊髓背角的Ⅰ～Ⅳ层和Ⅹ层。Western Blot结果显示有三种分子量的nNOS表达，分别位于155、135和125KD左右，155KD的nNOS表达的相对灰度SNI组高于对照组（P0.05）；135KD的nNOS表达的相对灰度SNI组高于对照组（P0.05）；而125KD的nNOS表达的相对灰度两组差异无统计学意义（P0.05）。RACE-PCR和Southern Blot实验证实有三种nNOS（nNOSα、β和γ）的mRNA表达。PCR结果显示存在nNOSα、nNOSβ的mRNA。PC12细胞转染nNOSα后增加NF-kappa B转录活性（P0.05），而nNOSβ降低NF-kappa B转录活性（P0.05）；结论：大鼠脊髓背角有三种神经型一氧化氮合酶（nNOSα、β和γ）表达；神经病理性疼痛时nNOSα表达升高，而nNOSβ降低；由于结构不同，nNOSα增加PC12细胞NF-kappa B转录活性，nNOSβ则降低其活性；可能与疼痛的机制有关。因此可以认为神经病理性疼痛大鼠脊髓背角nNOSα和nNOSβ的表达变化可能是致痛机制之一。 关键词：神经病理性疼痛；脊髓；神经型一氧化氮合酶；核因子kappa B The diversities of neural nitric oxide synthase expression in spinal cord of rats with neuropathic pain and their effects on NF-kappa B activity in PC12 cells Xiaogao Jin, Ailin luo*, Ping wang# , Guangxiong Zhang, Jintao Wang, Yawen Li . *Department of Anesthesiology, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan, P.R.China, 430030; #Department of Anesthesiology, The people’s hospital of Enshi state，Enshi, P.R.China. [Abstracts] Objective To observe the diversity and changes of nNOS expression in spinal cord in rat with neuropathic pain, and To determine effects of overexpression of nNOSα or nNOSβ on NF-kappa B activity and apoptosis in PC12 cells. Methods 20 female SD rats (weight ranged from 150 to 200g) were randomized into two groups，control group and G