基因表达答案.ppt

基因及基因表达的定性 及定量分析策略;一、基因的结构特点;结构基因的特点 原核生物：连续、无内含子，无需剪接加工等。 真核生物：;二、基因的定量及定性分析;（一）DNA序列测定;Sanger双脱氧末端终止法;Maxam-Gilbert 化学裂解法;;（二）基因拷贝数的分析;核酸分子杂交;杂交的本质：就是在一定条件下使互补核酸链实现复性　　 利用探针（probe）与靶DNA杂交，可识别靶DNA中的特异核苷酸序列 探针：探针是指带有某些标记物（如放射性同位素 32P ，荧光物质异硫氰酸荧光素等）的特异性核酸序列片段。 ;核酸分子杂交的基本原理;;影响杂交的因素;分子杂交的基本方法;Southern 印迹杂交;Southern blot 核酸探针分子在一定条件下与结合在固相支持物上的具有一定同源性的DNA分子可以完全或部分退火形成双链，通过检测探针 信号，可对待检测DNA进行定性或半定量分析。 ;Southern 杂交(Southern bloting)的主要步骤;;; bp —1534 — 994 — 695 — 515 — 377 — 237;;;;PCR技术;Mullis开车的时候, 瞬间感觉两排路灯就是DNA的两条链，自己的车和对面开来的车象是DNA聚合酶，面对面地合成着DNA， ……;;PCR不只是一个方法改进 1991，Cetus公司以3亿美元的转让费将PCR相关专利转让给瑞士Hoffman LaRoche公司，并在此后的经营中又获得了数亿美元的分红 Mullis于1993年获得诺贝尔化学奖，PCR和DNA重组技术一样意义深远 Good idea +work hard +publish=Success;生物学领域几乎无处不用;医学领域;原位杂交(in situ hybridization);核酸原位杂交的基本步骤;原位杂交技术（in situ hybridization,ISH）;（三）基因表达的定量及定性分析;RNA的定性与定量分析;Northern 印迹杂交(Northern bloting);RT-PCR 是一种将cDNA合成与PCR技术结合分析基因表达的快速灵敏的方法，主要用于对表达信息进行检测或定量分析。 ;蛋白质的定性与定量分析;Western 杂交印迹法(Western bloting);;流式细胞术;免疫组化; 生物芯片;生物芯片的分类;基因芯片：是指将大量探针分子固定在物体表面，与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度，进而获取样品分子的数量和系列信息。 它以其可同时、快速、准确地分析数以千计的基因组信息而显示巨大威力。 目前，基因芯片已经应用于基因表达检测、寻找新基因、杂交测序、基因突变等许多方面。;蛋白芯片：是以蛋白质代替DNA作为检测对象，比基因芯片更进一步接近生命活动的物质层面，因而有着比基因芯片更加直接的应用前景。 ;芯片实验室：是生物芯片技术发展的最终目标。它将样品制备、生化反应和检测分析的全过程集约化，形成微型分析系统。目前，这种形式尚处于研发阶段。; DNA芯片技术的基本原理;据芯片的性能与用途分： 1）毛细管型微芯片 2）基因探针型微芯片 据DNA芯片上微排列的DNA不同分： 1）寡核苷酸芯片 2）cDNA芯片;◆芯片方阵的构建 ◆样品制备 ◆生物分子反应 ◆信号的检测及分析 ; 可在基因组水平进行基因表达和发现研究、突变、序列测定等，已方泛应用于基因组研究和人类疾病的诊断等多领域。;Home