新紫外可见分光光度计的使用资料.ppt

紫外可见分光光度计;主要内容;物质的颜色与吸收光的关系： 当白光照射到物质上时，如果物质对白光中某种颜色的光产生了选择性的吸收，则物质就会显示出一定的颜色。物质所显示的颜色是吸收光的互补色。 ;互 补 色 原 理;; 利用一定频率的紫外--可见光照射分析物，它将有选择地被吸收。吸收光谱可以反映出物质的特征。 ;;;双光束分光光度计;组成：光源、单色器、样品池、检测器 1．光源： 　　①能提供连续的辐射；②光强度足够大；③在整个光谱区内光谱强度不随波长有明显变化；④光谱范围宽；⑤使用寿命长，价格低。?钨灯——可见光区 320～2500nm 氢灯或氘灯——紫外光区 195－375nm U3010（碘钨灯、氘灯）波长范围190-900nm ;2．单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件 　　单色器是分光光度计的心脏部分，它的作用是把来自光源的混合光分解为单色光并能随意改变波长。它的主要组成部件和作用是： ①入射狭缝——限制杂散光进入。 ②色散元件——即棱镜或光栅，是核心部件，可将混合光分解为单色光。? ③准直镜——把来自入射狭缝的光束转化为平等光，并把来自色散元件的平等光聚焦于出射狭缝上。 ④出射狭缝——只让特定波长的光射出单色器。? ;3. 吸收池 玻璃——由于吸收紫外UV光，仅适用于可见光区； 石英——适用于紫外和可见光区 4．检测器：将光信号转变为电信号的装置 光电管 光电倍增管 二极管阵列检测器 5．记录装置：讯号处理和显示系统 ;Slit 1不存在，Mirror取代了光栅grating 1 Grating2 variable-pitch aberration-corrected diffraction grating 旋转镜将光分成两束，分别通过参比池和样品池，然后聚集在PMT;;启动UV Solution软件;　2　运行UV Solution软件。软件将自动配置计算机的串行口（RS 232 Port）见图;仪器在初始化过程中进行如下自检工作： ROM检测 RAM检测 波长步进电机运转检测 氘灯点亮检测 钨灯点亮检测 仪器波长校正;3 仪器主机开始初始化。见图 ;4 仪器主机初始化完毕，进入工作状态。;5 测量参数设置;General:总体设置页面 Measurement测量: Wavelength scan 波长扫描 Time scan　时间扫描 Photometry 定波长测量 Operator操作者: 输入操作者的姓名 Instrument仪器:仪器型号由软件自动从仪器主机获得。 Use Sample Table使用样品表:选择是否使用样品表。 Comments备注:填写一些备注信息。 [Load]按钮:用于装载原来保存的方法文件。 [Save]按钮:保存当前的设置参数。 [Save As]按钮:将当前设置参数另存为一个方法文件。;Instrument仪器参数设置页面;Data mode读数显示方式，选择Abs吸光度，波长扫描的起止范围一般为190-800，狭缝值一般为2 Light一般选择“Auto” ;Monitor显示页面;Processing数据处理页面 ;Report报告结果页面 ;样品名设置，备注信息及文件名输入;基线校正;测　　量;;测量参数设置;具体操作程序; 　在measure中选择波长wavelength，在Calibration中选择“1st order”， “2st order”， “3st order”，也可以不校准。在concertration中键入标准浓度单位。 3. Instrument ;4 standards标准参数设置 键入标系的样品浓度及名称 ;5 吸光度自动校零 　在开始测试前，需要进行吸光度校零。在样品室参比和样品光路中分别放入空白样品。按按钮 　进行吸光度校零。 6 在wavelength中设定扫描的最大吸收波长， 7 放入标样，选中第一个标样，点measure依次测定完成 　???　 后自动给出标准曲线。 8 选择SAMPLE进行样品测定，全部测定完后点击END，此 时自动生成一个文件，打开此文件，另存为所需的文件名。 9 关机时，先退出UVsolution，再关电脑，最后关光度计上的power。;三 注意事项;3. 测量条件的选择： 选择适宜波长的入射光:由于有色物质对光有选择性吸收,为了使测定结果有较高的灵敏度,必须选择溶液最大吸收波长的入射光。 控制吸光度A的准确的读数范围:由朗伯-比耳定律可知,吸光度只