第10章_高效液相色谱分离检测技术.ppt

4.4 高效液相色谱分离方式;1、固定相（柱填料） 常用填料基质可分为硅胶、氧化物和聚合物。 硅胶是HPLC 填料中最常用的基质。它具有良好的机械强度、容易控制的孔结构和比表面积、较好的化学稳定性和热稳定性以及专一 的表面化学反应等优点外，还有一个突出的优点就是其表面含有丰富的硅羟基，这是硅胶可以进行表面键合或改性的基础。 缺点：在碱性水溶性流动相中不稳定。; 1. 液-液分配及离子对分离固定相 （1）全多孔型担体 氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；早期采用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见。 现采用10μm以下的小颗粒，化学键合制备柱填料。;4.4.1 液谱分离系统;一、化学键合相色谱法 ;2．分离原理;疏溶剂作用理论 ;（1）溶质分子中非极性部分的总表面积 溶质和固定相接触的总表面积愈大，保留值愈大，所以溶质的极性愈弱，疏水性越强，保留值越大。 （2）键合相上的烷基总面积 烷基键合固定相的作用在于提供非极性的作用表面。随着碳链的加长，烷基的疏水特性增强，溶质的保留值也随烷基碳链长度的增加而增大。;（3）流动相的表面张力 流动相的表面张力愈大，介电常数愈大，极性亦愈强；溶质和烷基键合相的缔合作用愈强，流动相的洗脱强度弱，导致溶质的保留值大。 （4）流动相的酸碱性和盐浓度 酸性抑制弱酸解离，增加保留时间；碱性抑制弱碱解离，增加保留时间；盐浓度增加不利于离子化溶质保留。;二、离子色谱法 ;2．固定相与流动相;（2）流动相----水缓冲溶液 ;三、反相离子对色谱法;2．常用离子对试剂;第2节 高效液相色谱仪 ;一、输液系统;2．梯度洗脱装置 ;四元外梯度洗脱装置双泵(串联)工作原理示意图 ;3．洗脱方式;2．自动进样器;三、分离系统;2．填充剂-----最常用填充剂为化学键合硅胶 ;三维色谱图 ;2．电化学检测器;3．蒸发光散射检测 ;第3节 定性与定量分析技术 ;;2．不加校正因子的主成分自身对照法 ;第4节 高效毛细管电泳简介 ;4.分离原理 ;1．毛细管柱及温度控制;2．高压电源;4．电极和溶液控制系统;三、毛细管电泳法的模式及应用;第5??? 应用案例;二、应用案例