流式细胞仪的原理介绍.ppt

流式细胞仪的原理及应用;流式细胞术的基本概念;流 式 细 胞 术 的 特 点;流式细胞仪的基本概念;BD FACSCanto流式细胞分析仪 ;流式细胞仪的检测范围;一、流式细胞仪的工作原理;1.流式细胞仪的基本结构;（1）液 流 系 统;液 流 系 统 示 意 图;液流速度：低速、中速、高速;（2）光 学 系 统;（3）数 据 处 理 系 统;流 式 细 胞 仪 与 显 微 镜 的 区 别;二、散 射 光 的 测 量;前 向 散 射 光（FS）;前 向 散 射 光 示 意 图;侧 向 散 射 光（SS）;侧 向 散 射 光 示 意 图; 光 散 射 测 量 的 用 途;三、荧 光 的 测 量;荧 光 染 料 的 特 性;荧 光 信 号 的 检 测;四、细 胞 分 选 原 理;细 胞 分 选 示 意 图;五、数 据 的 显 示 与 分 析;（一）参 数 说 明;（二）数 据 显 示 方 式;1.单 参 数 直 方 图;单 参 数 直 方 图;2.双 参 数 直 方 图;双 参 数 直 方 图 点 图;（三）设 门 分 析 技 术;A 淋巴细胞 B 单核细胞 C 中性粒细胞;线性门; 2. 区阈（Region设置）: ;六、流式细胞仪免疫分析的技术要求 ;（一）免 疫 样 品 的 制 备;单 细 胞 悬 液 的 制 备 与 保 存;（二）常 见 的 荧 光 染 料;（三）免 疫 荧 光 标 记;（三）流式细胞免疫学技术的质量控制;2. 免疫荧光染色的质控 温度 pH 染料浓度 固定剂 ;3. 仪器操作的质控 光路与流路校正: 确保激光光路与样品流处于正交状态，减少变异（CV）。 PMT（光电倍增管）校准: 保证样品检测时仪器处于最佳灵敏度工作状态。 绝对计数校准: 保证计数的准确性。 ;4. 免疫检测的质控 同型对照：即免疫荧光标记中的阴性对照，选用相同源性的未标记单抗作为对照调整和设置电压，以保证特异性。（通常采用未染色细胞作为阴性对照） 全程质量控制：同型对照与待测标本一起标记和检测，该实验结果可靠。;七、流 式 细 胞 仪 的 科 研 应 用;FCM 在 细 胞 生 物 学 中 的 应 用;DNA 细 胞 周 期 分 析; 细 胞 周 期（cell cycle）;;PI染色检测细胞周期 Protocol ; Modfit LT 分 析 细 胞 周 期;; 细 胞 周 期 结 果 分 析;Peng zhang; Free Radical Research,2009,43(3):224-233.; 细 胞 凋 亡 的 检 测; FCM 检 测 细 胞 凋 亡 的 特 点; Annexin-V 和 PI 双 染 protocol ; Annexin-V和PI双染的特点和注意???项;Effect of PQQ on MeHg-induced distributive change of early and late apoptotic cells. (A) control. (B) PC12 cells were treated with MeHg for 4 h. (C) Cells were pre-treated with PQQ for 30 min and then were exposed to MeHg for 4 h;Q3: 正常细胞； Q4：早期凋亡细胞； Q2：晚期凋亡细胞； Q1：坏死细胞。;荧 光 补 偿;;; 补 偿 方 法; 细胞内活性氧水平的检测（DCFH-DA）;;上机前使用300目过滤网过滤，以防进样针堵塞。;;;