第五章 培养基的灭菌10。6.ppt

第五章 培养基及设备的灭菌; 第一节 培养基灭菌的目的、要求 和方法 第二节 湿热灭菌的理论基础 第三节 培养基灭菌的工程设计 ;第一节培养基灭菌的目的、要求和方法 ;2，灭菌与消毒的区别 灭菌：用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物，包括营养细胞、细菌芽孢和孢子 消毒：用物理或化学方法杀死物料、容器、器皿内外的病源微生物。;二、培养基灭菌的目的 ;2，工业上具体措施包括： 1）使用的培养基和设备须经灭菌； 2）好氧培养中使用的空气应经除菌处理； 3）设备应严密，发酵罐维持正压环境； 4）培养过程中加入的物料应经过灭菌； 5）使用无污染的纯粹种子。;3，培养基灭菌的目的 杀灭培养基中的微生物，为后续发酵过程创造无菌的条件。;4，培养基灭菌的要求 达到要求的无菌程度（10-3） 尽量减少营养成分的破??，在灭菌过程中，培养基组分的破坏，是由两个基本类型的反应引起的： 培养基中不同营养成分间的相互作用； 对热不稳定的组分如氨基酸和维生素等的分解。;5，灭菌的方法 化学法 化学药品灭菌法: 0.1%~0.25%KMnO4溶液、 0.5%~1%漂白粉溶液、 75%酒精、 0.25%新洁尔灭、 10%甲醛溶液、 苯酚溶液、 来苏尔;物理法;射线灭菌法;过滤除菌法;; 湿热灭菌法;1)，湿热灭菌的原理 每一种微生物都有一定的最适生长温度范围。当微生物处于最低温度以下时，代谢作用几乎停止而处于休眠状态。当温度超过最高限度时，微生物细胞中的原生质胶体和酶起了不可逆的凝固变性，使微生物在很短时间内死亡，加热灭菌即是根据微生物这一特性而进行的。借助蒸汽释放的热能使微生物中的蛋白质,酶,核酸分子内部的化学键,特别是氢键受到破坏,引起不可逆的变性,使微生物死亡;2)，湿热灭菌中的相关定义 杀死微生物的极限温度称为致死温度。在致死温度下，杀死全部微生物所需的时间称为致死时间；在致死温度以上，温度愈高，致死时间愈短。 微生物的热阻：是指微生物在某一特定条件（主要是温度和加热方式）下的致死时间。相对热阻是指某一微生物在某条件下的致死时间与另一微生物在相同条件下的致死时间的比值。 芽孢的热阻特别高的原因：①芽孢具有吡啶二羧酸，能增强对热抵抗力②芽孢厚而且结构致密，热不易透过③芽孢的游离水分少，蛋白质含水量较营养细胞蛋白质含水量低。 在实际生产中，由于不能完全了解杂菌的数量和类型，因此要以相对热阻大的芽孢作为灭菌的依据。;各种微生物对湿热的相对热阻;3)，湿热灭菌的优缺点 优点 蒸汽来源容易，操作费用低，本身无毒； 蒸汽有强的穿透力，灭菌易于彻底； 蒸汽有很大的潜热； 操作方便，易管理。 缺点:蒸汽直接加到培养基,带来水分,细胞浓度发生变化,关键因素影响很大,蒸汽量算进去 ,怕湿的 不能,碳酸钙变成氧化钙,不能同时 加进去 .尿素灭菌与培养基的灭菌不同 .物料的不同灭菌要求 ;第二节 湿热灭菌的理论基础 ;二、微生物的热死灭动力学方程 实验证明，微生物营养细胞的均相热死灭动力学符合化学反应的一级反应动力学，即： （1） N：任一时刻的活细菌浓度（个/L） t：时间（min） K：比热死速率常数（min-1）;100℃时不同时间活菌的存活数;取边界条件t0=0，N=N0，对（1）积分得 （2） 或 （3）;相同温度下,k越小越耐热,121下细菌芽孢的k为1min,营养细胞10-1010;实验还证明，细菌孢子的热杀灭动力学与营养细胞的有所不同。它表现为非对数的死亡动力学。这可能与孢子壁的化学成分及结构有关。但当温度超过120?C时，热阻极强的嗜热脂肪芽孢杆菌孢子的热杀灭动力学也接近对数死亡动力学即符合一级反应规律。;三、温度对K的影响(灭菌温度的选择) 微生物的热死灭动力学接近一级反应动力学 它的比热死灭速率常数K与灭菌温度T的关系可用阿累尼乌斯方程表征 （4） A：频率因子（min-1） ΔE：活化能（J/mol） R：通用气体常数[J/（mol.k）];从（4）可以看出： 活化能ΔE的大小对K值有重大影