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PAGE  PAGE 17 PCR的大体操作流程 TAE和TBE各代表什么 ?快速电泳缓冲液，20×(Fast Buffer for electrophoresis,20×） ?????? 产品编号??????包装???????? ?????? EP1101?? 500ml?????? ?????? EP1102?? 1000ml??? 产品说明: 快速电泳缓冲液以硼酸盐为基础，是常规的核酸电泳缓冲液如Tris-硼酸(TBE)或Tris-醋酸(TAE) buffer的升级换代产品。快速电泳缓冲液允许在高电压电泳，产热少，分辨率高，电泳速度极快，可以在几分钟内完成电泳。用1%浓度的琼脂糖凝胶即可高分辨率分离PCR片段，带型锐利。 ? 特点： ◆?? 高电压电泳数分钟内完成，比TBE/TAE快3倍 ◆?? 特别适合PCR片断，对短条带分辨率极高且带型锐利 ◆?? 不影响核酸条带回收、转膜、EB观察 ? 用法： ◆?? 用纯水将20×快速电泳缓冲液稀释为1×快速电泳缓冲液。 ◆?? 用快速电泳缓冲液配制琼脂糖凝胶。也可用TBE/TAE缓冲液配制凝胶。 ◆?? 用快速电泳缓冲液进行电泳。小胶电压150 V，中等或大胶电压200-250 V。应优化电压。 ◆? EB可加入快速电泳缓冲液或凝胶内，紫外观察核酸条带。 储存：室温或4℃。 关于核酸染料 ??核酸染料GELVIEW ?????? 产品编号?????? 包装????? ?????? EP1501?? ?? ?1ml??????????? ?????? EP1502?? ?? 10ml??? ? 产品说明： Gelview是一种新型核酸染料，当用琼脂糖电泳检测DNA时，Gelview与核酸结合后能产生极强的荧光信号，其灵敏度比EB高，其使用方法与EB完全相同。由于溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂，对人体有很大危害，而Gelview经检验未发现有致癌作用，因此用其代替EB是一种很好的选择。在紫外透射光下，双链DNA呈现极其鲜明的绿色荧光。 ? 使用方法： ◆?? 将20ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%～2%）在微波炉中融化。 ◆?? 待胶冷却至50-60℃时.加入2μl Gelview，轻轻摇匀，避免产生气泡。 ◆?? 倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。 ◆?? 电泳完毕在紫外灯下观察。若使用数码相机照像记录，则关闭相机的闪光灯，放在自动档即可；若使用凝胶成像系统照相，通过调节光圈、曝光时间，选择合适的滤光片，可得到成像清晰、背景较低的照片。 ? 注意事项： ◆??? 胶厚度不宜超过0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度。 ◆??? 加入Gelview的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响，但不明显。 ◆??? 通过凝胶电泳回收DNA片段时，建议使用Gelview染色，在自然光下切割DNA条带，避免紫外线与EB对目的DNA产生的损伤，可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。 ◆?? 电泳结果显示Gelview灵敏度比EB高 DEPC是什么 你的TAE是用在RNA操作中么？如果是当然你所有的水都该是用DEPC处理过了的，当然补足时也用DEPC水。如果配置中用的是双蒸水，当然也用双蒸水补足。需要注意的是，DEPC水中的DEPC一定要保证失活完全。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。 关于琼脂糖凝胶电泳 亲爱的战友，我想问在胶的浓度和PCR产物目的条带的大小之间有没有什么比例关系，比如，我的目的条带是620bp，内参是180bp,师姐告诉我要配2%的胶，但是我不知道这两者的关系是怎么回事，还请各位大侠多多指教啊！谢谢谢谢！！！！！！！ 0.3%,恐怕没等你连电源，SAMPLE就弥散了，而且，胶本身比豆腐脑还稀，下刀也是个问题罢一般我自己的经验就是大片段（3kbp以上）使用0.7~0.8%的胶，中等大小的片段（500bp~3kbp）使用1％的胶，小片段（150bp～500bp）使用1.5~2%的胶，更小的片段甚至可以使用3％的胶（比较极端，一般只用于oligo anealing）回到楼主的问题，既然180碱基的片段是内参，应该不是楼主想要回收的片段罢，这个区间是可能与loading dye重合的区域，但不至于看不到。目的片段600多被loading dye遮住的可能性不大，即使遮住，只要量足够，在紫外灯下看到和拍照都是完全没有问题的