植物染色质免疫沉淀分析（chip）试剂盒.docVIP

植物染色质免疫沉淀分析（CHIP）试剂盒 产品说明书 主要用途 植物染色质免疫沉淀分析（CHIP）试剂是一种旨在通过甲醛交联、物理或化学处理细胞核以及染色质，从而运用特异抗体结合免疫沉淀，然后萃取DNA，扩增分析，来确定结合蛋白的目标DNA序列的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于DNA复制、重组、修复、转录、病毒组装中的DNA和蛋白质（包括转录因子、聚合酶、组蛋白等）的相互作用的研究。广泛应用于定性检测各种植物组织（花瓣、叶片、种子等）DNA蛋白结合序列和定量检测序列特异性DNA结合蛋白（例如转录因子）及其突变形成等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，反应敏感，结合显著，重复性好。 技术背景 DNA和蛋白质的相互作用是调控细胞反应过程的要素之一。染色质免疫沉淀分析方法（chromatin immunoprecipitation；CHIP）是研究活体内（in vivo）DNA和蛋白质的相互作用的最新最有力的工具：用于分析染色质结构动力学、转录因子调节、以及表观遗传学变异等。CHIP技术通过三大步骤实现：第一，甲醛固定后染色质分离和断片；第二，运用特异蛋白之抗体，免疫共沉淀结合蛋白（包括转录因子、聚合酶、组蛋白等）的染色质片断；第三，分析目标DNA和蛋白的修饰。其中转录因子作为调节蛋白，通过结合核DNA，以达到控制基因表达。 产品内容 清理液（Reagent A）毫升 固着液（Reagent B）毫升终止液（Reagent C）毫升裂解液A（Reagent D）毫升裂解液B（Reagent E）毫升裂解液C（Reagent F）毫升核溶液（Reagent G）毫升稀释液（Reagent H）毫升结合液（Reagent I）毫升低盐液（Reagent J）毫升高盐液（Reagent K）毫升平衡液（Reagent L）毫升缓冲液（Reagent M）毫升洗脱液（Reagent N）毫升解联液（Reagent O）毫升酶解液（Reagent P）微升萃取液（Reagent Q）毫升浓缩液（Reagent R）毫升沉淀液（Reagent S）毫升净化液（Reagent T）毫升扩增液（Reagent U）微升补充液（Reagent V）毫升说明书1份 保存方式 保存裂解液A（Reagent D）、裂解液B（Reagent E）、裂解液C（Reagent F）、核溶液（Reagent G）、稀释液（Reagent H）、结合液（Reagent I）、解联液（Reagent O）、酶解液（Reagent P）、萃取液（Reagent Q）、浓缩液（Reagent R）和扩增液（Reagent U）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里； 有效保证6月 用户自备 特异抗体：用于目标蛋白的结合 特异引物：用于目标DNA的扩增或测序 1.5毫升离心管：用于样品反应操作和保存的容器 2毫升离心管：用于样品反应操作和保存的容器 15毫升锥形离心管：用于样品处理的容器 50毫升锥形离心管：用于植物组织处理的容器 恒温水槽：用于孵育反应物 震荡器：用于混匀反应物 4℃微型台式离心机：用于沉淀样品 4℃台式离心机：用于沉淀样品 平式摇荡仪或摇床：用于孵育和混匀反应 DOUNCE匀浆器：用于裂解植物组织细胞 超声仪：用于裂解植物组织细胞核 PCR仪：用于扩增反应 电泳仪：用于检测扩增产物 实验步骤 实验开始前，准备好待测植物的预处理：药物处理等。同时将－20℃保存的试剂置于冰槽里融化。然后进行下列操作。 一、 植物组织细胞核分离 1． 准备好新鲜处理的植物组织（花瓣、叶片、种子等），并秤重1克组织重量 2． （选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管 3． （选择步骤）加入 毫升清理液（Reagent A）清洗1次 4． 即刻用刀片切碎组织 5． 或置于液氮管过夜，次日取出后，即刻（最快速度）碾碎组织成粉末（注意：切莫使组织冻融） 6． 放进15毫升锥形离心管 7． 加入 毫升室温预热的固着液（Reagent B） 8． 平放置于摇床，室温下（25℃）孵育15分钟，速度为100RPM 9． 加入 微升室温预热的终止液（Reagent C） 10．继续平放置于摇床，室温下（25℃）孵育5分钟，速度为100RPM 11．放进台式离心机离心5分钟，速度为1000g 12．小心抽去上清液 13．加入 毫升预冷的清理液（Reagent A），混匀 14．放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为1000g 15．小心抽去上清液 16．重复实验步骤13至15二次 17．加入 毫升预冷的裂解液