第四章动物干细胞资料.ppt

胚胎干细胞;2007年十大科学突破;2008年十大科学突破;2010年十大科学突破;2012年十大科学突破; 第一节 干细胞的概念和分类;全能干细胞 多能干细胞 单能干细胞;全能干细胞： （Totipotent stem cell）;胚胎干细胞; 第二节 胚胎干细胞;1958年, Stevens最早发现了畸胎瘤干细胞 1981年, Evans和Martin分别成功地分离和体外培养了小鼠的胚胎干细胞 1995年, Thomson等人分离建立了第一株灵长类动物的胚胎干细胞 1998年, Thomson等建立了第一株人类胚胎干细胞 1998年, Shamblott等建立了第一株人类生殖干细胞 2006年, Takahashi等建立了第一株小鼠iPS 2007年, Takahashi等建立了第一株人iPS 2008年，Andrew French首次用字体皮肤细胞克隆出人类胚胎，但未能成功提取出胚胎干细胞;二、胚胎干细胞的生物学特性;2.生化特征;3. 其他特征;三、胚胎干细胞系的建立（以小鼠ES为例）;2.胚胎的来源;普通培养法 囊胚在分离培养液中培养2－5d 吸取ICM，胰酶消化，用培养液中和酶 分散后ICM小团块与饲养层细胞共培养，7天后更换培养液，形成细胞克隆。 离散细胞克隆为单细胞，转移到新的饲养层细胞，形成小的细胞克隆即分离培养成功。 ;免疫外科法;4.胚胎干细胞的增殖培养;A.小鼠成纤维饲养细胞上培养8天后的ICM（标尺＝100um） B.ICM中分离出的H9细胞系（标尺＝100um） C. H9细胞系（标尺＝50um） D.在无小鼠胚胎成纤维细胞，但有LIF（20ng/ml）的条件下培养5d后，H9细胞发生分化（标尺＝100um） ;5.胚胎干细胞的鉴定;干细胞培养过程;第三节 成体干细胞;慢周期性 自我更新和再生能力的有限性 可塑性: 超越特定组织、分化成其他组织的功能性细胞，参与其他损伤组织的修复。;三、成体干细胞的类别;4.1 概念;4.2 来源;4.3 生物学特性;4.4 分离;4.5 鉴定（特异性的表面标志）;4.6 临床应用;;第四节 干细胞的定向分化;一、干细胞分化的机制;细胞间的相互作用： 细胞诱导：是一部分细胞对邻近细胞产生影响,并决定邻近细胞分化方向及形态发生的过程。 细胞抑制：在胚胎发育中,已分化的组织细胞产生抑素,抑制邻近细胞进行同样分化,以避免相同的器官重复发生或过度发育。 细胞外物质的介导作用：包括细胞外基质、黏附分子、激素和细胞因子等。目前研究最多的是生长因子。 ;二、胚胎干细胞的定向分化;;胚胎干细胞的诱导分化： 胎牛血清，骨髓基质细胞共培养 胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－－?造血细胞 　RA 胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－－?神经细胞 DMSO 胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－－?肌肉细胞 TGF-B1, VEGF, bFGF 胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－－?血管和内皮细胞 RA+胰岛素+T3 胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－－?脂肪细胞 BMP-2, BMP-4 胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－－?软骨细胞 　地塞米松，磷酸甘油 胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－－?骨细胞 基因转染 胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－－?胰岛素分泌细胞;人胚胎干细胞注射至免疫缺陷小鼠的后腿肌肉中形成的各种组织： （a）肠样结构；(b)神经上皮花结；(c）骨骼；(d)软骨 ；(e)横纹肌；(f)肾;Culturing Hematopoietic Stem Cell;;;四、ESC与ASC的比较;五、干细胞的应用;2.人造器官 美国麻省总医院的科学家将在实验室培育的人工肾脏移植到小鼠体内后，这个通过“生物工程”法制造的器官成功地发挥了正常肾脏的功能——尽管效率上还不如天然肾脏 研究者通过去掉老鼠肝脏上的细胞，剩下一个“支架”，然后将2亿个健康的肝细胞分4次、每次10分钟注射到支架上进行培植，成功培植出人造老鼠活肝，在实验室存活10天之久，并能够分解毒素。;3.药物安全评价 药物研发行业中一个掩藏的很深的黑暗秘密，那就是很少有药物在用于人体试验前先在人类疾病细胞中进行试验，利用干细胞技术可以改变这一状况。 新加坡研制“人造肝脏”用于新药毒性试验 ;谢谢各位！;小结;作业：;iPS细胞;成体干细胞临床应