CHARP 2 色谱法概论(一).pptVIP

第二章 色谱法基础（一）An introduction to chromatography ;2.1 色谱法和有关术语 2.1.1 Tswett实验 色谱法（chromatography） 色谱柱、固定相、流动相。 色谱法是一种分离方法，色谱分离的基础是混合物中各组分在两相中分配系数的差异。 ;2.1.2 色谱图和有关术语 ;相对保留值;色谱流出曲线的意义：;§ 2.1.3 色谱分析理论; 在填充柱内填充的固定相有两类 即气-固色谱分析中的固定相和气液色谱中的固定相。;一、描述分配过程的参数;2. 分配比(Retention factor or capacity factor, k)：;4. 选择因子?;二 色谱理论;一. 塔板理论;1 塔板理论; 通常用塔板高度和塔板数来评估色谱柱的柱效。所以，塔板理论可以近似描述柱内过程的实际情况。; 2 速率理论方程理论吸收了塔板理论中塔板高度的概念，并同时考虑色谱过程中影响塔板高度的动力学因素，指出填充柱的柱效受分子扩散，传质阻力和载气流速等因素的控制。 ;涡流扩散项(Multipath term, A);2）分子扩散项(Longitudinal diffusion term, B/u);气液色谱中组分在流动相和固定相中的传质过程;传质阻力项(Mass-transfer term, Cu);;;一.分离度(Resolution,RS); R值越大意味着相临两组分分离得越好。而两组分保留值的差别主要取决于组分在流动相和固定相分配的热力学性质：色谱峰的宽窄则反映了色谱过程的动力学因素，柱效能的高低。因此分离度是柱效能选择性影响的总和，可用其作为色谱柱的总分离性能指标。 ;R=1.5;二. 色谱分离基本方程式;因为Y1与Y2近 似相等，等于Y2;讨论： 1）分离度R与柱效 ?一定, L↑，R↑，tR↑ 2）分离度R分配比k k↑，R↑，通常k在2~10之间。 改变 k ：增加柱温(GC)、流动相性质和组成(LC)以及固定相含量。 3）分离度R与容量因子? ? 越大，柱选择性越好 改变? ：T柱↓、改变流动相及固定相的性质和组成。;概念、表示方法及计算公式汇总;表-2;例：两物质A和B在30cm长的色谱柱上的保留时间分别为16.4和17.63min，有一不与固定相作用的物质，其在此柱上的保留时间为1.30 min。物质A和B的峰底宽分别为1.11和1.21min。试问： 1）柱分辨率R； 2）柱平均理论塔板数nav 3）平均塔板高度Hav 4）若要求R=1.5，则柱长至少应为多少？;tr1= 16.40 tr2= 17.63 ，W1=1.11, W2=1.12;2-6 色谱定性和定量方法 ; 1、用已知物对照定性 一定操作条件下，各组分保留时间是一定 具体做法： 1）分别以试样和标准物进样 2）对照：试样中某峰的保留时间和标样中某峰重合，则可初步确定试样 中含有该物质。 3）样品中加入标准物，峰增加来确定。;2. 据经验式定性 1）碳数规律：lgtr’=An+C (n?3) 2）沸点规律：lgtr’=ATb+C 3. 据相对保留值 ri,s 定性：温度一定;4. 保留指数(Kovats指数)定性(重现性较好的定性指标) 求出未知物 Ix， 与文献值对照。 5. 双柱或多柱定性 6. 与其它方法结合定性 如GC-MS，GC-IR，GC-MS-MS;2.7 色谱定量方法; ;1. 归一化法 若n个组分全部出峰，则i组分的百分含量wi(%)为：;2.内标法 将一定量的，纯物质作内标物，加入到准确称量的试样中，根据被测物和内标物的质量，及其在色谱峰上的峰面积比，求出某组分的含量。;一般以内标物为基准，fs=1, 则上式可简化为：;* 只需测量试样中的几个组分，试样所有组分不能全部出峰时，可采用此法。 * 由于是通过测量被测物和内标物在色谱峰上的峰面积比值来进行计算的, 因而由于操作条件变化而引起的误差， 都将同时反映在被测组分和内标物的面积上，所以可以 得到较准确的结果。;3. 外标法： 以欲测组分的纯物质来制作标准曲线。 准确度取决于进样量的重现性和操作条件的稳定性。;定量方法