07第七章酶化学分析.ppt

酶动力学及其作用机制;第一节 酶引论;酶促反应的特点：;c. 酶促反应的可调控性; d.具有高度的底物专一性（specificity）;结构专一性;（1） 绝对专一性;（2） 相对专一性;键专一性 例如：脂肪酶 糖苷酶 蛋白酶;（3） 立体专一性; 酶的立体专一性包括旋光异构专一性、顺反异构专一性和区分对称分子中的两个相同的基团。;（a）锁钥学说 ;;(b)“三点结合”的催化理论（A.Ogster）;H;HO;（c）诱导契合学说;酶蛋白 (apoenzyme) ：多肽；决定特异性、高效性;辅酶辅基与维生素及核苷酸的关系;1. 稳定构象：稳定酶蛋白催化活性所必需的分子构象； 2. 构成酶的活性中心：作为酶的活性中心的组成成分，参与构成酶的活性中心，如辅酶或辅基； 3. 连接作用：作为桥梁，将底物分子与酶蛋白螯合起来。;2.2 酶的四级缔合 ;多功能酶;如：大肠杆菌 色氨酸合成酶;1.酶活力: 指酶催化一定化学反应的能力，酶活力与酶催化的化学反应速度成正比 2.反应速度：用单位时间、单位体积中底物的减少量或产物的增加量表示（单位：浓度/时间） 3.酶的活力单位 1个酶活力单位（IU）: 规定的条件下,在1分钟内催化1μmol底物转化为产物的酶量（1961年)。 1个Katal:规定的条件下,每秒钟内催化1mol底物转化为产物的酶量（1972年)。 条件：温度25摄氏度,其它条件(PH及底物浓度)均采用最适条件。　; ;;4．酶的比活力 酶含量大小，即每毫克蛋白所具有的酶活力单位/毫克蛋白 （μ/mg蛋白质) 每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少个活力单位来表示 （单位/克 or 单位/ml）对同一种酶来说，比活力越高，表示酶越纯。 5．酶的转换数kcat 每分钟1mol酶分子转换底物的微摩尔数（μmol） ;6．酶活力的测定 反应时间尽量短，5min之内 温度、pH等条件保持恒定 为了让酶的催化潜能重复表现出来，底物和酶的辅助因子必须过量 反应初速度与底物浓度是零级反应，与酶浓度是一级反应 酶反应进程曲线 酶浓度曲线 对照和空白 ;典型例题;解：（1）由题意，已知2ml酶液中含0.2mg蛋白氮， 则1ml酶液中含0.1mg蛋白氮 因为，蛋白质中平均含N量16% 所以，0.1mg氮相当于蛋白质的量为：0.1/16%=0.625mg 即：1ml酶液中蛋白质含量为0.625mg 又已知：0.1ml酶液中每小时产生1500 μg酪氨酸 则：1ml酶液中每小时产生1500 ×10μg酪氨酸 据定义：每分钟产生1 μg酪氨酸的酶量为1个活力单位 所以：1ml酶液中所含酶单位为：;（2） 比活力是指酶活力单位/mg酶蛋白 由前计算可知：0.625mg酶蛋白含250酶单位 则：1mg酶蛋白含x个酶单位 ;一、酶促反应的速度和影响因素;底物对酶促反应的饱和现象;稳态模型的4个假设： E与S形成ES复合物的反应是可逆反应，快速平衡反应， ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速度取决于限速步骤 S的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的初始阶段，S的浓度可认为不变即[S]＝[St] 游离酶浓度=[E]-[ES] 不考虑 P + E→ ES 这个逆反应 ;1913年Michaelis和Menten提出反应速度与底物浓度关系的数学方程式，即米－曼氏方程式，简称米氏方程式(Michaelis equation)。;推导过程: 游离酶浓度=[Et]-[ES] ES生成速度=k1([Et]-[ES])*[S] ES分解速度=k2[ES]+ k-1[ES] 当稳态时： ES生成速度=ES分解速度 k1([Et]-[ES])*[S]= k2[ES]+ k-1[ES]; ([Et]-[ES])*[S] k-1+ k2 [ES] k1 [ES]= 因v=k2[ES]，当所有E被S饱和时，即达到最大速度，此时[ES]=[Et]，Vmax=k2 [Et] 代入上式：; 米-曼氏方程解释： 当[S]??Km时，v =(Vmax/Km) [S], 即v 与[S]成正比 当[S]??Km时，v0 ?Vmax，即[S]?而v不变 当反应速度等于最大速度一半时,即V = 1/2 Vmax,Km = [S]